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RNA干渉で乳がん関連遺伝子を破壊したヒト乳腺細胞の放射線感受性と造腫瘍性の検討

RNA干扰破坏乳腺癌相关基因的人乳腺细胞的放射敏感性和致瘤性检查

基本信息

批准号：
15710051
负责人：
相良雅史
金额：
$ 2.37万
依托单位：
National Institute of Radiological Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15710051/
关键词：
RNA干渉法 BRCA1 14-3-3σ siRNA

项目摘要

本研究の目的は、遺伝子の発現を人為的に抑制することによってそれらの遺伝子の機能を調べる方法として、近年新しく開発された手法であるRNA干渉法を利用して、目的とする癌関連遺伝子BRCA1および14-3-3σ遺伝子の発現を抑制することで、その細胞が相同組換え修復能あるいはG2/Mチェックポイントを喪失し、放射線高感受性になることを確認することである。そこで、Elbashirらの方法を参考にして、ヒト正常乳腺由来細胞MCF10においてBRCA1または14-3-3σ遺伝子の発現を抑制できるdsRNAを作製した。その際、以下の点について検討を行った。1.それぞれの遺伝子の発現抑制に有効なdsRNAの配列を検討するため、3種類ずつのdsRNAを合成して細胞に導入後、mRNAの発現レベルを調べたところ、それぞれ70〜90%の減少が認められた。2.発現抑制に最適なdsRNAの導入濃度を検討したところ、100nMで導入した際に最も発現レベルの抑制が認められた。3.細胞へのdsRNAの導入法を検討したところ、Oligofectamineを用いた導入法が最も適していた。4.発現抑制の持続期間を測定した結果、導入後72時間で最も発現レベルの抑制が認められた。5.各遺伝子の発現を抑制した細胞において、他の遺伝子発現がどのように変化しているかをマイクロアレイを用いて解析した。それぞれの遺伝子の発現を抑制した場合において、発現が抑制された遺伝子群および活性化された遺伝子群、また挙動が共通した遺伝子群に分類した。6.各遺伝子をターゲッテイングした細胞に種々の線量の放射線を照射したところ、BRCA1および14-3-3σ遺伝子のどちらの場合でも発現を抑制した細胞は放射線に対して高感受性となっていることが明らかとなった。

本研究目的在于探讨，骨髓细胞癌人的细胞抑制因子能特异性地修复骨髓细胞癌基因的方法，近年来新的骨髓细胞癌基因修复方法修复RNA干NTFS法的利用价值，目的在于探讨骨髓细胞癌BRCA1亚型14-3-3σ细胞癌基因抑制因子能特异性地修复骨髓细胞癌基因G2/M的缺失，放射性高感受性过敏性鼻炎，会引起过敏反应。Elbashir法参考标准，乳腺正常乳腺癌因来癌细胞MCF10乳腺癌因BRCA1乳腺癌因14-3-3σ受体拮抗剂抑制乳腺癌dsRNA作引物。その際、以下の点について検討を行った。1.双脱氧核糖核酸酶抑制剂具有抑制dsRNA合成的功能，3.双脱氧核糖核酸酶抑制dsRNA合成的功能，3. mRNA合成的功能，4. mRNA合成的功能，5. mRNA合成的功能，7. mRNA合成的功能，8. mRNA合成2.100 nM的干扰素加入到抑制最强dsRNA的浓度范围内，100nM的干扰素加入到抑制最强dsRNA的浓度范围内。3.细胞转染dsRNA掺入法制备寡核苷酸，Oligofectamine用寡核苷酸掺入法制备最佳寡核苷酸。4.禁止买卖维持期定额罚款，计入72岁以下最高罚款额，禁止买卖维持期定额罚款。5.他将这种抑制肿瘤细胞增殖的机制，应用于各种肿瘤细胞的增殖和分化，并将其应用于各种肿瘤细胞的增殖和分化。それぞれの遺伝子の発現を抑制した場合において、発現が抑制された遺伝子群および活性化された遺伝子群、また挙動が共通した遺伝子群に分類した。6.各参比子实体均为非结构化细胞，其细胞壁均为非结构化细胞，BRCA1受体14-3-3σ参比子实体均为非结构化细胞，其细胞壁均为非结构化细胞，其细胞壁均为非结构化细胞。