权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

特異的糖鎖構造認識能を有する機能性ペプチドアレイの構築

具有特异性糖链结构识别能力的功能肽阵列的构建

基本信息

批准号：
15710157
负责人：
坂本清志
金额：
$ 2.37万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、任意の糖鎖構造を高親和的かつ高選択的に認識可能な機能性ポリペプチドの構築を第一段階の目標とした。その目的をふまえ、α-ヘリックス構造やβ-ターン構造を形成すべくde novo設計したポリペプチド高次構造の化学合成を行った。さらに、設計したポリペプチド高次構造を基体として、人工機能性基であるボロン酸基の位置特異的導入を試みた。次いで、任意の糖分子に対して結合部位を最適化するため、ボロン酸導入位置周辺の数残基を19種の標準アミノ酸でランダム化したペプチドライブラリを、スプリット・ミックス法やパラレル合成法で調製した。蛍光ラベルしたオリゴ糖分子や糖ユニットを含む補酵素であるフラビンアデニンジヌクレオチド(FAD)を基質としたスクリーニングの結果、格糖認識能を有する機能性ペプチド分子の獲得に成功した。得られた数種のポリペプチドの一次配列解析によって、効率的糖ユニット結合に必要となるファクターを分子レベルで見いだすことができた。また、得られたペプチド配列情報をもとに設計・合成した人工ペプチドは、溶液中で安定な高次構造を形成し、糖基質やFADを高い親和性と選択性をもって結合可能であることが明らかとなった。以上より、糖-ペプチド複合体形成に必要ないくつかのポリペプチド高次構造要素を確立することが出来た。また、得られた人工ペプチド配列と天然タンパク質の複合化に基づく新規融合タンパク質の構築も試みた。さらに、ペプチドライブラリの固相上への固定化を行い、糖鎖認識ペプチドアレイの構築を達成した。固相表面上での人工ペプチドの糖鎖認識機能を詳細かつ系統的に評価し、人工設計ペプチドアレイの性能を明らかとした。

In this study, we investigated the possibility of functional selection of high affinity structures for arbitrary sugar chains. The purpose of this paper is to form a novel design for the chemical synthesis of high-order structures. In addition, the design of high-order structural matrix, artificial functional groups and position-specific introduction In the second place, the binding site of any sugar molecule is optimized. The number of residues around the introduction position of the acid is 19. The standard acid is modulated by the method of synthesis. The successful acquisition of functional sugar molecules containing complementary enzymes (FAD) and substrates, as well as sugar recognition capabilities, was reported. A number of species were identified and analyzed for the first time. In addition, the structure of the sugar matrix is stable in solution, and the high affinity and selectivity of the sugar matrix are possible. The necessary factors for the formation of the sugar-sugar complex are established. In addition, the structure of the artificial structure and the natural structure of the artificial structure are also studied. In addition, the immobilization of the solid phase of the protein and the structure of the protein were achieved. The sugar lock recognition function of artificial selection on the solid surface is detailed, and the performance of artificial selection is clearly defined.