膜結合型グルタチオンS-トランスフェラーゼの結晶構造解析

膜结合谷胱甘肽S-转移酶的晶体结构分析

• 批准号: 16770086
• 负责人: 浜田 恵輔
• 金额: $ 2.37万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16770086/
• 关键词: 膜タンパク質; 膜結合型グルタチオン転移酵素; X線結晶構造解析; 細胞膜結合型グルタチオン転移酵素; 膜蛋白質; 解毒反応

細胞膜結合型グルタチオン転移酵素(microsomal gluthathione S-transferase ; MGST)は、細胞内異物に対する解毒作用や脂肪の酸敗の主因である脂質ヒドロペルオキシドに対する還元作用のほか、アラキドン酸カスケードで合成される生理活性物質であるロイコトリエンやプロスタグランジンE2の合成を触媒する機能を併せ持つことが知られている。MGSTは喘息や炎症に対する薬剤ターゲットになる可能性があるため、その立体構造は薬剤探索において重要な情報を与える。本研究では、MGSTのX線結晶構造解析を行い、立体構造と機能解析から酵素活性機構の解明を目指す。これまでに、マウス由来のMGST1について、大腸菌によるタンパク質発現系を構築し、タンパク質の安定化のための界面活性剤の探索を含めた精製法の検討を行い、結晶化条件の探索を行った。さらに、従来法のほか立方液晶相を利用しての結晶化の検討を行った。その結果、全長MGSTについて結晶の析出がみられたが、X線回折実験の結果から、結晶は低分解能の反射しか与えず、現段階では構造解析には至っていない。同結晶の結晶化条件の最適化やアニーリング、デハイドレーション等の操作による分解能の向上や回折異方性の軽減を試みた。MGSTは広い基質特異性をもつことが知られており、グルタチオンを含めた酵素一基質類似体との複合体の調製を行い、複合体の安定性の検討および結晶化条件の検索を行っている。

microsomal gluthathione S-transferase; は MGST), foreign bodies in the cell に す seaborne る detoxification や fat の rancidity の main で あ る lipid ヒ ド ロ ペ ル オ キ シ ド に す seaborne る also yuan role の ほ か, ア ラ キ ド ン acid カ ス ケ ー ド で synthetic さ れ る physiological active substances で あ る ロ イ コ ト リ エ ン や プ ロ ス タ グ ラ ン ジ ン E2 を の synthesis catalyst す る function を and せ つ こ と が ら Youdaoplaceholder0 れて る. MGST は breathing や inflammation に す seaborne る 薬 tonic タ ー ゲ ッ ト に な る possibility が あ る た め, そ の three-dimensional structure は 薬 tonic explore に お い て important な intelligence を and え る. In this study, the X-ray crystal structure of で で and MGST samples was analyzed to determine the を row で, the three-dimensional structure と was analyzed to determine the function of ら, the active mechanism of enzymes was explained to determine the を finger す. こ れ ま で に, マ ウ ス origin の MGST1 に つ い て, coliform に よ る タ ン パ ク qualitative 発 now を build し, タ ン パ ク qualitative の stabilization の た め の interface active tonic の explore を containing め た refining process の beg を 検 line の い, crystallization conditions to explore を っ た. Youdaoplaceholder0 and 従 are used to obtain cubic liquid crystal phase を from <s:1> ほ 検 検 crystallization 検 to discuss を. そ の results, the total length of MGST に つ い て crystallization precipitation の が み ら れ た が inflexion by X-ray and be 験 の results か ら, low crystalline は decomposition reflects の し か and え ず, now Duan Jie で は structure に は to っ て い な い. With crystallization の の crystallization conditions optimization や ア ニ ー リ ン グ, デ ハ イ ド レ ー シ ョ ン の operations such as に よ る decomposition to の や back to fold up different sexual の 軽 minus を try み た. MGST は hiroo い substrate specificity を も つ こ と が know ら れ て お り, グ ル タ チ オ ン を containing め た enzyme a similar body と matrix composite の の を い, complex modulation の stability の beg お 検 よ び crystallization conditions の 検 cable line を っ て い る.

项目成果

Crystal structure of the protein histidine phosphatase SixA in the multistep His-Asp phosphorelay

• DOI: 10.1111/j.1365-2443.2005.00817.x
• 发表时间: 2005-01-01
• 期刊: GENES TO CELLS
• 影响因子: 2.1
• 作者: Hamada, K;Kato, M;Hakoshima, T
• 通讯作者: Hakoshima, T

分子生物学実験シリーズ「図・写真で観るタンパク構造・機能解析実験実践ガイド」タンパク質の立体構造解析を行うために-分子構造解析のためのタンパク質試料調整法

分子生物学实验系列《蛋白质结构/功能分析实验实用指南（图文并茂）》进行蛋白质3D结构分析-分子结构分析的蛋白质样品制备方法

• 发表时间: 2005
• 作者: 椎名政昭;浜田恵輔;緒方一博
• 通讯作者: 緒方一博