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膜結合型グルタチオンS-トランスフェラーゼの結晶構造解析

膜结合谷胱甘肽S-转移酶的晶体结构分析

基本信息

批准号：
16770086
负责人：
浜田恵輔
金额：
$ 2.37万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

細胞膜結合型グルタチオン転移酵素(microsomal gluthathione S-transferase ; MGST)は、細胞内異物に対する解毒作用や脂肪の酸敗の主因である脂質ヒドロペルオキシドに対する還元作用のほか、アラキドン酸カスケードで合成される生理活性物質であるロイコトリエンやプロスタグランジンE2の合成を触媒する機能を併せ持つことが知られている。MGSTは喘息や炎症に対する薬剤ターゲットになる可能性があるため、その立体構造は薬剤探索において重要な情報を与える。本研究では、MGSTのX線結晶構造解析を行い、立体構造と機能解析から酵素活性機構の解明を目指す。これまでに、マウス由来のMGST1について、大腸菌によるタンパク質発現系を構築し、タンパク質の安定化のための界面活性剤の探索を含めた精製法の検討を行い、結晶化条件の探索を行った。さらに、従来法のほか立方液晶相を利用しての結晶化の検討を行った。その結果、全長MGSTについて結晶の析出がみられたが、X線回折実験の結果から、結晶は低分解能の反射しか与えず、現段階では構造解析には至っていない。同結晶の結晶化条件の最適化やアニーリング、デハイドレーション等の操作による分解能の向上や回折異方性の軽減を試みた。MGSTは広い基質特異性をもつことが知られており、グルタチオンを含めた酵素一基質類似体との複合体の調製を行い、複合体の安定性の検討および結晶化条件の検索を行っている。

Membrane-bound trypsin transferase (microsomal gluthathione S-transferase) MGST), intracellular substances, detoxification, fatty acid failure, mainly due to the presence of lipids, fatty acids, fatty acids, fatty MGST gasps for breath. Inflammation is not possible. It is possible to explore and explore important relationships. In this study, the results of MGST X-ray analysis and stereoscopic machine can be used to analyze the enzyme activity mechanism. The cause of the disease, the origin of the MGST1, the bacteria, the stability, the activity of the interface, the conditions of crystallization and the conditions of crystallization. In this paper, the cubic liquid crystal phase is used to crystallize the crystal. The results of the experiment, the results of the full-length MGST analysis, the results of the X-ray analysis, the results of the X-ray analysis, the results of the low decomposition energy of the results, and the analysis of the segment temperature. With the crystallization conditions of the crystallization conditions, such as the operation of the most effective method, such as the crystallization condition, the decomposition of the operation can be analyzed in an upward manner. It is known that the MGST gene contains the enzyme-like complex, the stability of the complex, the crystallization condition of the complex and the crystallization condition of the complex.