权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

膜結合型グルタチオンS-トランスフェラーゼの結晶構造解析

膜结合谷胱甘肽S-转移酶的晶体结构分析

基本信息

批准号：
16770086
负责人：
浜田恵輔
金额：
$ 2.37万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

細胞膜結合型グルタチオン転移酵素(microsomal gluthathione S-transferase ; MGST)は、細胞内異物に対する解毒作用や脂肪の酸敗の主因である脂質ヒドロペルオキシドに対する還元作用のほか、アラキドン酸カスケードで合成される生理活性物質であるロイコトリエンやプロスタグランジンE2の合成を触媒する機能を併せ持つことが知られている。MGSTは喘息や炎症に対する薬剤ターゲットになる可能性があるため、その立体構造は薬剤探索において重要な情報を与える。本研究では、MGSTのX線結晶構造解析を行い、立体構造と機能解析から酵素活性機構の解明を目指す。これまでに、マウス由来のMGST1について、大腸菌によるタンパク質発現系を構築し、タンパク質の安定化のための界面活性剤の探索を含めた精製法の検討を行い、結晶化条件の探索を行った。さらに、従来法のほか立方液晶相を利用しての結晶化の検討を行った。その結果、全長MGSTについて結晶の析出がみられたが、X線回折実験の結果から、結晶は低分解能の反射しか与えず、現段階では構造解析には至っていない。同結晶の結晶化条件の最適化やアニーリング、デハイドレーション等の操作による分解能の向上や回折異方性の軽減を試みた。MGSTは広い基質特異性をもつことが知られており、グルタチオンを含めた酵素一基質類似体との複合体の調製を行い、複合体の安定性の検討および結晶化条件の検索を行っている。

Cell membrane-bound glutathione S-transferase (MGST) has the function of detoxifying intracellular foreign substances and the main cause of fat rancidity. It also has the function of catalyzing the synthesis of physiologically active substances such as E2. MGST is responsible for exploring the possibility of inflammation and its three-dimensional structure. This study is aimed at the X-ray crystal structure analysis, three-dimensional structure analysis, enzyme activity mechanism elucidation of MGST. The study of MGST1, the origin of MGST1, the construction of a quality development system for Escherichia coli, the study of an interfacial active agent for the stabilization of MGST1, and the study of crystallization conditions were carried out. In addition, the method of crystallization of cubic liquid crystal phase is discussed. The results show that the precipitation of crystals in the full-length MGST is very high, the results of X-ray reflection are very high, the reflection of crystals with low decomposition energy is very low, and the structural analysis of the current stage is very high. Optimization of Crystallization Conditions for Crystallization, Reduction of Decomposition Energy and Anisotropy MGST is a matrix specific protein that can be used to determine the stability and crystallization conditions of a complex containing an enzyme-matrix analog.