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大腸菌走化性レセプタへの好塩菌走光性サブシステムの組み込み

将嗜盐趋光子系统纳入大肠杆菌趋化受体

基本信息

批准号：
16770109
负责人：
鷲見正人
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

サルモネラ菌の走化性レセプタと、好塩菌Natronobacterium pharaonisの光シグナルトランスデューサの遺伝子とその産物は、後者におけるリガンド結合部位の欠如を除けば、まったく同じドメイン構造を有することが分かっている。本研究では、1)サルモネラ菌の走化性レセプタのリガンド結合部位を、好塩菌の光シグナルトランスデューサ膜貫通部分の短いループ部への融合、2)(1)の産物の下流に、サルモネラ菌走化性レセプタのシグナリング部位を融合、という第二段階のステップを踏む予定であったが、本年度に予定どおりには遂行できなかった。理由として、作製した融合タンパク質について、大腸菌ホストにおける、比較的大量の発現と、膜内での安定性を確認できたにもかかわらず、界面活性剤による可溶化、単離・精製過程を経ることによりタンパク質試料として不安定になり、ITC測定などに必要な透析作業などによりリガンドへの結合活性が著しく低下してしまうことが判明したからである。また、作成した融合タンパク質とのITC測定値等定量性の比較に用いるため、サルモネラ菌の走化性レセプタをリガンド結合部と膜貫通部分のみを有するタンパク質断片を発現して得ようとしたが、これもうまくゆかなかった。そこで本年度は、サルモネラに代えて、ホストである大腸菌由来の走化性レセプタ遺伝子を用い、まったく同じ融合タンパク、および、比較用の断片タンパク質を作ることができないかを試みた。同時に、大腸菌の走化性レセプタの断片タンパク質の発現も試み、これらに成功した。ITC測定を通じて、この断片タンパク質および作成した融合タンパク質のリガンドおよび走化性レセプタタンパク質との結合サイト数および結合定数は、それぞれ無傷な走化性レセプタとリガンド、走光性トランスデューサとレセプタとの文献値と一致することを確認することができた。

The chemical properties of the bacteria are different from those of the bacteria Natronobacterium pharaonis. The chemical properties of the bacteria Natronobacterium pharaonis are different from those of the bacteria Natronobacterium pharaonis. The products of the bacteria Natronobacterium pharaonis are different from those of the bacteria Natronobacterium pharaonis. This study includes: 1) fusion of the binding site of the mobility profile of the bacteria, the light profile of the bacteria, and the short profile of the membrane penetration portion; 2) fusion of the downstream mobility profile of the product of (1), and the second stage of the mobility profile of the bacteria. Reasons for this, for the preparation of fusion, for the detection of Escherichia coli, for the comparison of large amounts of occurrence, for the confirmation of stability in the membrane, for the solubilization, separation and purification of interfacial active agents, for the detection of instability in the quality of the sample ITC determined that the binding activity of the protein was low when it was necessary for dialysis. The quantitative comparison of ITC measurement value, etc. of the fusion material and the formation of the fusion material shows that the fusion material and the ITC measurement value of the fusion material and the This year's edition of the book is titled "The Origin of Coliform Bacteria". At the same time, the transformation of E. coli into a fragment of the protein was successfully carried out. ITC measurement is consistent with the literature value of the quality of the product, the number of the product, the number of the product.