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ポストゲノムにおける魚類サイトカイン遺伝子群の発現解析と生理機能に関する研究

鱼类细胞因子基因组后基因组表达分析及生理功能研究

基本信息

批准号：
16780145
负责人：
吉浦康壽
金额：
$ 2.37万
依托单位：
Fisheries Research Agency
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16780145/
关键词：
トラフグサイトカイン組換えタンパク質昆虫細胞定量PCR IL-12 IFN-γ

项目摘要

これまでの研究経過概要トラフグおよびゼブラフィッシュのゲノムデータベースからサイトカイン遺伝子群の配列情報を収集し、多くの魚類新規サイトカイン遺伝子の単離・同定に成功した。その中でウイルスの感染防御に重要な役割を果たすと考えられるIL-12およびIFN-γについては、リアルタイムPCRを用いた遺伝子発現量の測定系を確立した。また魚類サイトカインの生理機能を解析するため、昆虫細胞を用いて組換えトラフグIL-12を作製するとともに、トラフグIL-12のアミノ酸配列をもとに合成したオリゴペプチドを抗原としてウサギに免役し、抗トラフグIL-12抗血清を得た。感染・発病に伴う一連のサイトカイン遺伝子群の発現動態を解明するため、トラフグロ白症ウイルス感染後のIL-12およびIFN-γ遺伝子の発現動態を解析した結果、感染後のリンパ器官においてIL-12およびIFN-γのmRNA量の増加が認められ、ウイルス感染でこれらのサイトカイン遺伝子の発現が誘導されることが明らかとなった。本年度の研究経過概要トラフグIL-12の生理作用をin vitroで解析するために、トラフグの末梢血白血球を分離し、培養する系を確立した。この末梢血白血球培養系に組換えトラフグIL-12の産生する昆虫細胞の培養上清を添加して、IFN-γ遺伝子の発現が誘導されるか否かを調べた。しかしながら、昆虫細胞の培養上清のみでも、IFN-γ遺伝子の発現が誘導されたため、IL-12によるIFN-γ遺伝子の発現誘導活性を調べることができなかった。今後は、培養上清から組換えトラフグIL-12を精製し、培地成分を除去した標品を調整する必要があることが明らかとなった。

This study summarized the results of the study and collected the information on the distribution of fish species, and successfully identified the new fish species. An assay system was established for the detection of IL-12 and IFN-γ in the presence of PCR. The physiological functions of fish and insect cells were analyzed and IL-12 was synthesized by using recombinant IL-12 and anti-IL-12 antiserum. Analysis of IL-12 and IFN-γ gene expression dynamics in infected and infected organs. Results: Increased IL-12 and IFN-γ mRNA levels in infected and infected organs. Summary of this year's study: The physiological role of IL-12 in vitro analysis, isolation and culture of peripheral leukocytes was established. The production of IL-12 in the culture supernatant of insect cells was regulated by the addition of IFN-γ gene to the culture supernatant of peripheral blood leukocyte culture system. The expression of IFN-γ gene was induced by IL-12 in culture supernatant of insect cells. The expression of IFN-γ gene was induced by IL-12. In the future, it is necessary to change the culture supernatant to IL-12 and remove the standard components.