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RNAスプライシング因子SF3a66による微小管制御機構の解明

阐明RNA剪接因子SF3a66的微管控制机制

基本信息

批准号：
16790163
负责人：
竹中圭
金额：
$ 2.24万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790163/
关键词：
SF3a66 微小管微小管束化高分子量複合体神経突起形成

项目摘要

RNAスプライシング因子SF3a複合体はメッセンジャーRNAのスプライシングに関わるU2snRNPの必須な構成因子の一つであり、分子量が60KDa,66KDa,120KDaの3つのサブユニットからなっている。研究代表者はこれまでの研究で、SF3a66が神経芽細胞腫、N1E115細胞において単独で神経突起形成を誘導すること、又、in vitroで高い親和性をもって微小管と結合し、微小管を束化させる作用があることを明らかにした。更にこのメカニズムとして、SF3a66がオリゴマー化し、微小管を架橋させる作用があることを発見した。そこで、次ぎにこのような現像がin vitroや神経細胞以外でも観察されるのかどうか、またどの程度、普遍的生理的な現象かどうかを調べるため、Hela細胞を用いて実験を行った。SF3a66のRNA干渉法にてHela細胞にて発現量を抑制し、細胞染色にて細胞形態を調べた所、初期的な結果としてSF3a66が減少しているHela細胞は細胞死状の様子を示し、それに伴うと考えられる微小管、アクチンの染色の減少が認められたが、スプライシングの異常に起因すると思われる細胞死との区別は不可能であった。MAPs等の微小管結合因子は、細胞に発現させると微小管を束化させ、太い束状の構造体が細胞質内に観察される。そこで、SF3a66をHela細胞に強制発現させ、Hela細胞の微小管構造を観察した所、他の主要なMAPのように微小管が束化されるというような大きな変化は認められなかった。以上の結果から、SF3a66はN1E115細胞のような神経系細胞特異的に微小管制御因子として機能しうる可能性が示唆された。

RNA スプライシング factor SF3a complex はメッセンジャーRNA のスプライシングに关わるU2snRNPのRequiredなConstituting factor is の一つであり, molecular weight is が60KDa, 66KDa, 120KDaの3つのサブユニットからなっている. Research representative: はこれまでの Research で, SF3a66 が神経blastoma, N1E115 cells において単多で神経 protrusion formation を inducing すること, and, in It has high affinity in vitro and is a combination of microtubules and bundles of microtubules. Change the にこのメカニズムとして, SF3a66 がオリゴマー化し, microtube を bridging させる effect があることを発见した.そこで、时ぎにこのようなappearanceがin The extent and prevalence of the test outside the in vitro test The physiological phenomenon of the disease is adjusted and the Hela cells are used. SF3a66 RNA interference method is used to inhibit the current amount of Hela cells, cell staining, cell morphology, and adjustment, and initial results are used to reduce SF3a66 cells and Hela cells. Death-like の様子をshowし, それに合うと考えられるmicrotubule, アクチンの色REDのcognitionめられたが, スプライシングの abnormal に cause すると思われるcell death とのdifferentiation はimpossible であった. Microtubule-binding factors such as MAPs are present in cells, and microtubule bundles are present in cells, and bundled structures are detected in the cytoplasm.そこで、SF3a66をHela cells are forced to appear させ、The microtubule structure of Hela cells is observed. , His main MAP is a micro-tube bundle, and it is a bundle of pixels. The above results indicate the possibility of the function of microtubule control factors specific for SF3a66 N1E115 cells and God-derived cells.