权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

ES細胞特異的新規RasファミリータンパクERasの神経芽腫悪性化への関与

ES细胞特异性新型Ras家族蛋白ERas参与神经母细胞瘤恶性转化

基本信息

批准号：
16790584
负责人：
青山峰芳
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790584/
关键词：
ERas 神経芽腫薬剤耐性 AKT

项目摘要

本年度は、ES細胞特異的に発現している新規遺伝子ERasの発現を実際の神経芽腫摘出標本で確認し、腫瘍細胞株を用いてERas発現による腫瘍形成能、薬剤感受性の変化について解析した。1,神経芽腫摘出標本でのERasタンパクの発現患者または患者家族から遺伝子およびタンパク発現の解析について同意を得た神経芽腫患者摘出腫瘍切片を用いて免疫染色によりタンパクレベルでの発現を確認した。抗体は研究協力者の山中らがすでに作成し、特異性を確認できている抗ERas抗体を用いた。今回用いたほとんどすべての神経芽腫切片で発現を確認したが、特に未分化な腫瘍細胞ほど強い染色性を示した。また、ERasタンパクは細胞内の細胞膜に局在していると考えられた。2,神経芽腫細胞株でのERasの発現神経芽腫細胞株では複数の細胞株でERas遺伝子の発現をRT-PCRによって確認していたが、Western blottingによってタンパクレベルでの発現も同時に確認できた。3,神経芽腫ERas遺伝子強制発現株の解析ERas発現が確認できている中でも低発現である神経芽腫細胞株SH-SY5Yを用いてERas遺伝子を導入し強制発現株を作成した。これらのクローン細胞株は細胞増殖能に影響は与えない一方で、soft agarを用いた足場非依存性の増殖を亢進し、シスプラチン、ドキソルビシン、エトポシド、ビンブラスチンといった神経芽腫への化学療法剤による細胞死を抑制した。この薬剤耐性のメカニズムにはERas発現による下流シグナル分子のリン酸化を介したERas/Akt pathwayの活性化が重要な働きをしている可能性が示唆された。

This year, the development of ES cell-specific ERas, the development of real-time neuroblastoma, and the development of tumor cell lines with ERas were confirmed. 1. ERas of neuroblastoma patients were detected by immunostaining. The detection of ERas of neuroblastoma patients was confirmed by immunostaining of tumor sections obtained from neuroblastoma patients. Antibodies were developed by collaborators and used to confirm specificity of anti-ERas antibodies This study confirmed the presence of tumor cells in the brain, especially in undifferentiated tumor cells, which were strongly stained. The cell membrane inside the cell is in the middle of the cell. 2. ERas gene expression in neuroblastoma cell lines was confirmed by RT-PCR and Western blotting in a number of neuroblastoma cell lines. 3. ERas gene expression analysis of neuroblastoma cell strain SH-SY5Y was confirmed by ERas gene expression analysis. These cell lines are affected by cell proliferation, which can be inhibited by chemotherapy for neuroblastoma, such as soft agar, field independent proliferation, selection, selection, selection and selection. The possibility of activation of ERas/Akt pathways is demonstrated by the presence of ERas in the downstream molecule.