上皮細胞間接着における新規分子Calminの機能解析

新分子Calmin在上皮细胞-细胞粘附中的功能分析

• 批准号: 16790643
• 负责人: 高石 樹朗
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790643/
• 关键词: 上皮細胞; 細胞間接着; Calponin homology domain; calponin homology domain; siRNA

これまでの研究の中で、マウス胎児皮膚の発達過程で発現量が変化する新規の遺伝子としてCalminを単離した。このCalminはN端にCalponin類似のアクチン結合領域とC端に膜貫通領域を持つ。ヒト上皮株細胞であるHaCaT細胞やA431細胞を用いて検討した結果、Calminは上皮細胞において細胞間接着を構成する新規のタンパク質であることが示唆された。Calminの機能を明らかにすべく本年度は以下の検討を行った。1.これまでの研究によって、Calminは細胞間接着領域に局在することが明らかになっていたが、組織および細胞免疫染色を用いた検討により、核内にも局在することが示唆された。ウエスタン法を施行した結果、A431細胞をはじめとする上皮細胞の核画分にもCalminタンパク質の存在が確認された。ヒトCalminタンパク質の様々な切断変異体をGFP融合タンパク質としてMDCK細胞内で発現させたところ、膜貫通領域を欠き、かつ291〜380の領域を含むタンパク質が核に局在した。よって、ヒトCalmin291〜380ペプチド鎖内に核局在に必要な領域が含まれていることが明らかとなった。このペプチドに既知の核移行シグナル配列は見いだせない。どの様な機構により核に局在するのかを明らかにするためには更なる研究が必要である。2.前年度までにPlakoglobin(g-catenin)、p120cateninあるいはSmoothelinがCalminと結合するタンパク質である可能性が示されていたが、これを確認するための十分な検討が出来なかった。今後、継続すべき課題である。3.siRNA発現による発現抑制については、U6プロモーター持つプラスミドベクターに複数の標的配列を組み込み検討を行ったが十分な抑制効果を持つものが得られなかった。現在、tRNA^<VAL>プロモーター持つベクターを用いて新たに検討を行っている。

In the course of the study, the fetal skin test was conducted to determine the amount of information needed to meet the requirements of the new regulations. In this case, the Calmin was isolated. The N-terminal Calponin type of the Calmin is similar to that of the C-terminal membrane in the field. The cells of HaCaT cell line A431 and the cells of Calmin epithelial cell line A431 were sequenced to show that they were instigated. The Calmin will be able to tell you that the following financial information will be available for the current year. 1. In the field of research and research, the Calmin cell is followed by the field bureau, the organization, the cell immunostaining, and the intranuclear organ. According to the results of the implementation of the method, A431 cells were divided into Calmin cells, epithelial cells, epithelial cells, nuclear cells, cells, epithelial cells and epithelial cells. In this study, we found that there are some problems in the cells of GFP fusion, membrane communication, and the field of membrane communication. There are some problems in the field of GFP fusion, membrane communication, and the field of membrane communication in the cell of MDCK. In the field of "necessary", the nuclear bureau contains information in the field of "necessary" in terms of information and information. It is known that the nuclear transfer is related to the nuclear migration. The regulatory agency and the nuclear inspection bureau are required to make further studies on the necessary conditions. two。 In the previous year, the Plakoglobin (g-catenin), p120catenin