関節リウマチのパンヌス形成に関与する分子機構解明

阐明类风湿性关节炎血管翳形成的分子机制

• 批准号: 16790842
• 负责人: 加畑 多文
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790842/
• 关键词: 関節リウマチ; パンヌス; PEA3; 転写因子; ETS; cDNAマイクロアレイ

本研究の目的は、関節リウマチ(以下、RA)におけるPEA3の発現とその意義を検討することである。昨年度のウェスタンブロッティング、RT-PCRによる検討ではRAにおけるPEA3の発現は症例による発現差が大きかったため、本年度はreal-time PCRとcDNAマイクロアレイを用いて更に詳細な検討を行った。(1)RA滑膜細胞におけるPEA3の発現(real-time PCR法を用いて)人工関節手術の際に得られたRA滑膜組織(5例)から滑膜細胞を分離・抽出し、primary cultureの滑膜細胞からmRNAを抽出した。対照として変形性関節症(以下、OA)患者由来の滑膜細胞(5例)を用いた。これらのmRNAにおけるPEA3、MMP-3の発現をreal-time PCR法で検討したところ、RAの2症例において特にPEA3が高発現であった。これら2症例はMMP-3も同様に高発現しており、臨床的にRAのstageが進行し、かつ術前のCRP値、MMP-3値が高い症例と一致していた。(2)PEA3高発現症例における遺伝子プロファイル解析(cDNAマイクロアレイを用いて)PEA3の発現が高かったRA2症例、低かったRA2症例、OA2症例のmRNAを用いてcDNAマイクロアレイ解析を行った。なお、t-testでp-value<0.05をcut off値とし、統計解析を施行した。RA群とOA群の比較から、RA特異的にup-regulateされる87の遺伝子と、RA特異的にdown-regulateされる12の遺伝子を明らかにした。更にRA特異的にup-regulateされる87の遺伝子中よりPEA3高発現症例でup-regulateされる20の遺伝子を検索した。この中には今までRAの炎症反応や病態形成に関与することが報告されているHLA-DRB1、clusterin、CD53遺伝子も含まれていた。特にHLA II型遺伝子であるHLA-DRB1は、自己抗体の産生に関与するとの報告もあり、PEA3がMMP-3やHLA-DRB1と密接に関わりながらRAの病態形成に関わっている可能性が示唆された。

The purpose of this study is to discuss the significance of the development of PEA3. Last year's PCR analysis showed that there was a big difference in the detection of PEA3. This year's PCR analysis showed that there was a more detailed analysis of PEA3. (1)RA Expression of PEA3 in synovial cells (real-time PCR method) Synovial tissues obtained during artificial joint surgery (5 cases) were isolated from synovial cells, and mRNA was extracted from synovial cells in primary culture. Synovial cells (5 cases) were used in patients with atypical arthrosis (OA). The expression of PEA-3 and MMP-3 was detected by real-time PCR in two cases of RA. In 2 cases, MMP-3 was found to be high, RA stage was progressive, CRP was high, MMP-3 was high, and RA stage was consistent. (2)PEA3 mRNA expression analysis (cDNA analysis)PEA3 mRNA expression analysis was performed in high RA2 cases, low RA2 cases, and OA2 cases. T-test, p-value<0.05, cut off, statistical analysis. A comparison between RA and OA groups shows that RA specific up-regulator is 87 genes and RA specific down-regulator is 12 genes. In addition, RA-specific up-regulation was detected in 87 cases of PEA3 high incidence. This report contains HLA-DRB1, clusterin and CD53 genes related to RA inflammation and pathogenesis. In particular, HLA-DRB1 is associated with the production of anti-HLA antibodies, PEA3 is associated with MMP-3 and HLA-DRB1 is associated with the pathogenesis of RA.