RNA干渉法による子宮頚癌治療開発の基礎的検討

子宮頸癌組織に組み込まれているHPVのE7遺伝子はその遺伝子産物であるE7蛋白質が癌抑制遺伝子産物であるRB蛋白質の失活を促し、E6遺伝子はその遺伝子産物であるE6蛋白質が癌抑制遺伝子産物であるP53の分解を促進することにより、癌細胞の増殖を促進している。そこで、E6,E7遺伝子をノックアウトすることにより、P53、およびRB蛋白質の機能を回復させ、癌細胞をアポプトーシスへと誘導することが可能か否かを検討する。本研究においてはHPVのE6,E7遺伝子に対するsiRNAを用い、子宮頸癌由来培養細胞株における生物学的効果を解析し、分子標的治療としてふさわしいか否かについて検討した。最初にHPV16型のE6,E7遺伝子に対するsiRNAをデザインしE6,E7遺伝子ノックアウトすることにより細胞増殖が抑制されるか否かを検討した。子宮頸癌由来培養細胞株のSKGIIIaは当研究室で樹立されたものであるが、HPV16型の遺伝子が組み込まれていることがすでに明らかとなっている。この細胞株にE6E7領域を標的としたsiRNAを導入したものの、細胞増殖抑制効果は認められなかった。次に、SKGI,SKGII細胞(両者ともに当研究室にて樹立された子宮頸癌由来培養細胞であり、HPV18型のE6E7遺伝子が組み込まれていることがすでに報告されている。)に対し、HPV18型のE6E7遺伝子に対するsiRNAを導入した。その結果、両者の細胞において増殖抑制効果が認められた。このHPV18型のE6E7遺伝子に対するsiRNAはSKGIIIa細胞においては増殖抑制効果を示さなかったことから、我々のデザインしたHPV18型のE6E7遺伝子に対するsiRNAは型特異的であることがわかった。次にこの細胞増殖抑制効果はトリパンブルーおよびベータギャル染色の結果からアポプトーシスでなく老化であることが判明した。

子宮頸癌組織に組み込まれているHPVのE7遺伝子はその遺伝子産物であるE7蛋白質が癌抑制遺伝子産物であるRB蛋白質の失活を促し、E6遺伝子はその遺伝子産物であるE6蛋白質が癌抑制遺伝子産物であるP53の分解を促進することにより、癌細胞の増殖を促進している。そこで、E6,E7遺伝子をノックアウトすることにより、P53、およびRB蛋白質の機能を回復させ、癌細胞をアポプトーシスへと誘導することが可能か否かを検討する。本研究においてはHPVのE6,E7遺伝子に対するsiRNAを用い、子宮頸癌由来培養細胞株における生物学的効果を解析し、分子標的治療としてふさわしいか否かについて検討した。最初にHPV16型のE6,E7遺伝子に対するsiRNAをデザインしE6,E7遺伝子ノックアウトすることにより細胞増殖が抑制されるか否かを検討した。子宮頸癌由来培養細胞株のSKGIIIaは当研究室で樹立されたものであるが、HPV16型の遺伝子が組み込まれていることがすでに明らかとなっている。この細胞株にE6E7領域を標的としたsiRNAを導入したものの、細胞増殖抑制効果は認められなかった。次に、SKGI,SKGII細胞(両者ともに当研究室にて樹立された子宮頸癌由来培養細胞であり、HPV18型のE6E7遺伝子が組み込まれていることがすでに報告されている。)に対し、HPV18型のE6E7遺伝子に対するsiRNAを導入した。その結果、両者の細胞において増殖抑制効果が認められた。このHPV18型のE6E7遺伝子に対するsiRNAはSKGIIIa細胞においては増殖抑制効果を示さなかったことから、我々のデザインしたHPV18型のE6E7遺伝子に対するsiRNAは型特異的であることがわかった。次にこの細胞増殖抑制効果はトリパンブルーおよびベータギャル染色の結果からアポプトーシスでなく老化であることが判明した。