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RNA干渉法による子宮頚癌治療開発の基礎的検討

RNA干扰法宫颈癌治疗开发的基础研究

基本信息

批准号：
16790967
负责人：
小野晃子
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790967/
关键词：
small interference RNA パピローマウイルス子宮頸がん

项目摘要

子宮頸癌組織に組み込まれているHPVのE7遺伝子はその遺伝子産物であるE7蛋白質が癌抑制遺伝子産物であるRB蛋白質の失活を促し、E6遺伝子はその遺伝子産物であるE6蛋白質が癌抑制遺伝子産物であるP53の分解を促進することにより、癌細胞の増殖を促進している。そこで、E6,E7遺伝子をノックアウトすることにより、P53、およびRB蛋白質の機能を回復させ、癌細胞をアポプトーシスへと誘導することが可能か否かを検討する。本研究においてはHPVのE6,E7遺伝子に対するsiRNAを用い、子宮頸癌由来培養細胞株における生物学的効果を解析し、分子標的治療としてふさわしいか否かについて検討した。最初にHPV16型のE6,E7遺伝子に対するsiRNAをデザインしE6,E7遺伝子ノックアウトすることにより細胞増殖が抑制されるか否かを検討した。子宮頸癌由来培養細胞株のSKGIIIaは当研究室で樹立されたものであるが、HPV16型の遺伝子が組み込まれていることがすでに明らかとなっている。この細胞株にE6E7領域を標的としたsiRNAを導入したものの、細胞増殖抑制効果は認められなかった。次に、SKGI,SKGII細胞(両者ともに当研究室にて樹立された子宮頸癌由来培養細胞であり、HPV18型のE6E7遺伝子が組み込まれていることがすでに報告されている。)に対し、HPV18型のE6E7遺伝子に対するsiRNAを導入した。その結果、両者の細胞において増殖抑制効果が認められた。このHPV18型のE6E7遺伝子に対するsiRNAはSKGIIIa細胞においては増殖抑制効果を示さなかったことから、我々のデザインしたHPV18型のE6E7遺伝子に対するsiRNAは型特異的であることがわかった。次にこの細胞増殖抑制効果はトリパンブルーおよびベータギャル染色の結果からアポプトーシスでなく老化であることが判明した。

Cervical cancer tissue contains HPV E7 protein and its gene products, E7 protein and cancer suppressor gene products, RB protein inactivation, E6 protein and cancer suppressor gene products, P53 decomposition promotion, and cancer cell proliferation promotion. E6,E7 proteins can be induced in cancer cells. The purpose of this study is to investigate the use of siRNA against HPV E6 and E7 genes, the biological effects of cervical cancer derived from cultured cell lines, and molecular target therapy. Initially, siRNA targeting HPV type 16 E6, E7 genes was used to investigate cell proliferation inhibition. SKGIIIa cervical cancer derived cell line was established in the laboratory and HPV16 gene expression was detected. The introduction of siRNA into the E6-E7 domain resulted in the inhibition of cell proliferation. SKGI,SKGII cells were cultured in the laboratory to establish cervical cancer origin cells, HPV18 and E6E7 genes. siRNA targeting HPV type 18 E6 and E7 genes The results of the study were as follows: siRNA targeting HPV type 18 and E6 E7 gene is type-specific for SKGIIIa cell proliferation inhibition. The results of cell proliferation inhibition were identified as follows: