プレB細胞の分化と癌化の分子機構の解明

阐明前B细胞分化和癌化的分子机制

• 批准号: 05J02444
• 负责人: 山本 睦美
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Tokyo University of Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05J02444/
• 关键词: B細胞; シグナル伝達; プレB細胞レセプター; B細胞初期分化; 遺伝子再構成; アダプター蛋白; 急性リンパ性白血病; pre-BCR; BASH; BLNK; SLP-65

pre-B細胞レセプター(pre-PCR)からのシグナルはL鎖遺伝子再構成を活性化すると考えられているが、その分子経路はほとんど明らかになっていない。BASH(BLNK/SLP-65)はB細胞特異的に発現するアダプター分子であり、pre-BCRおよびBCRからの細胞内シグナル伝達に重要な役割を担っている。特に、pre-BCRシグナルによるRAG2の発現抑制とその後の分化に伴うL鎖κ遺伝子再構成の促進にはBASHが必要であることが示唆された。そこで、本研究ではK遺伝子再構成を誘導するBASHより下流のpre-BCRシグナル経路を解明することを目的とし解析した。まず、実験材料として急性プレB白血病を発症したBASH欠損マウスよりプレB白血病細胞株(BKO84、他)を樹立した。そして、このプレB白血病細胞株がPMA刺激あるいはBASHの再構築によりL鎖κ遺伝子再構成やpre-BCRの発現低下を誘導することを見出した。特異的な阻害剤を用いた解析により、novel PKC(nPKC)とMEKの活性化はL鎖κ遺伝子再構成に必須であるが、Rasは必須でないことが明らかになった。さらに、レトロウィルス感染の系より、nPKCファミリー分子の一種である活性化型PKCηあるいはPKCε、またRaf-1をBASH欠損プレB細胞株に導入するとL鎖κ遺伝子再構成が誘導されたが、Rasでは誘導されなかった。次に、タモキシフェン(4-OHT)で活性誘導できるBASHの融合蛋白BASH-ER^<TM>を構築し、これをBKO84細胞株に安定導入したBLNK-ER^<TM>/BKO84細胞株を作製した。このBLNK-ER^<TM>/BKO84を4-OHT処理するとκ遺伝子再構成とpre-BCR発現低下が起こることを確かめた。4-OHT処理により、各nPKC分子の活性化を示すリン酸化レベルが4-OHT処理する前後で変化していないにも関わらず、共焦点レーザー顕微鏡を用いた解析によりPKCηおよびPKCεは細胞質から細胞膜へ移動し、κ遺伝子再構成の誘導を促進することが示された。以上の結果より、κ遺伝子再構成を誘導するpre-BCRシグナル経路は、Ras非依存的なBASH-nPKC-Raf-1を介することが明らかになった。

The molecular pathways in pre-B cells that activate L-lock gene recombination are not clear and clear. BASH(BLNK/SLP-65) plays an important role in B cell-specific molecular development, pre-BCR and BCR intracellular development. In particular, pre-BCR is required to inhibit the development of RAG2 and subsequent differentiation, as well as to promote the reconstruction of L-lock genes. This study aims to clarify the structure of the downstream pre-BCR system. In addition, the BASH deficient Mashushiri PLB leukemia cell line (BKO84, he) was established based on practical materials and the development of acute PLB leukemia. The results of PMA stimulation of B leukemia cell lines showed that BASH reconstruction and pre-BCR gene reconstruction were induced. When analyzing the use of specific inhibitors, the activation of novel PKC(nPKC) and MEK is necessary for the reconstitution of L-lock κ genes, and Ras is necessary. The expression of PKCε, Raf-1 and BASH deficient B cell lines was induced by the expression of PKCε, Raf-1 and BASH deficient B cell lines. BASH fusion protein BASH-ER^<TM>was constructed and stably introduced into BKO84 cell line BLNK-ER^ /BKO84 cell <TM>line. BLNK-ER^<TM>/BKO84 - 4-OHT treatment, pre-BCR generation and reconstruction 4-OHT treatment, the activation of each PKC molecule, acidification, before and after 4-OHT treatment, changes in the concentration of PKC, confocal microscopy analysis of PKC, PKCε and cytoplasmic membrane migration, κ gene recombination induction, and so on. As a result of the above, the recombination of the κ-gene is induced by the pre-BCR and Ras-independent BASH-nPKC-Raf-1.

项目成果

BASH-novel PKC-Raf-1 pathway of pre-BCR signaling induces κ gene rearrangement.

BASH 新型 PKC-Raf-1 前 BCR 信号传导途径诱导 κ 基因重排。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Blood 108
• 作者: Yamamoto;M.;Hayashi;K.;Nojima;T.;Matsuzaki;Y.;Kawano;Y.;Karasuyama;H.;Goitsuka;R.;Kitamura D.
• 通讯作者: Kitamura D.