異物センサー機能を有する核内レセプターCARの機能解析

具有异物传感功能的核受体CAR的功能分析

• 批准号: 05J02748
• 负责人: 菅野 裕一朗
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Toho University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05J02748/
• 关键词: 核内レセプター; Nuclear localization signal; Nuclear export signal; Nucleocytoplasmic shuttling; FRAP assay

Constitutive Androstane Receptor (CAR)は肝細胞などの細胞質に常在する核内レセプター遺伝子スパーファミリーに属する細胞内受容体型転写因子の一つであり、N末端側にDNA結合領域(DBD)を,C末端側にリガンド結合領域(LBD)を配し,これらが立体構造に自由度を付与するHinge領域により結合されている。PBなどの外因性異物(異物センサー機能)や未知の内因性物質(オーファンレセプターに分類される)を感知すると核内へ移行し、RXRとヘテロダイマーを形成して標的遺伝子上流に位置するシスエレメントに結合し転写活性化を引き起こす。したがって、細胞質から核への移行がCARによる転写活性化の重要なステップである。しかし、培養細胞系でCARを発現させると非刺激下でも核へ移行してしまい,PB応答性等のin vivoにおけるCARの挙動はin vitroでは観察できない。これまでにラットCARを用いて培養細胞においてCARの核移行に関与する二つの核移行シグナル(NLS1,NLS2)を明らかにしてきた(Biochem Biophys Acta.2005 1745 215-222)。細胞質と核を往来するシャトルタンパク質は核移行シグナル(Nuclear localization signal, NLS)と核外輸送シグナル(Nuclear export signal, NES)のバランスによってその局在が調節されていることが知られている。そこでFRAP assayを用いた観察により培養細胞系においてCARが核と細胞質を往来していることを明らかにするとともに、CARにはCRM1依存的なNESと非依存的なNESが一つずつ存在することを明らかにした。さらに、NLSの機能をラットとヒトのCARで比較したところラットCARのNLS1はヒトCARでは一つのアミノ酸が変異しているため機能していないことが明らかとなった。また、PB依存的なNLSとして見出されたXRSは,単独ではNLS機能をみられず,XRSのアミノ酸置換変異によってNLS2による核移行が阻害されたことから,NLS2の機能を調節することによって、CARの核移行を調節している可能性が示唆された。

Constitutive Androstane Receptor (CAR) is one of the intracellular receptor-type writing factors that are often present in the cytoplasm of hepatocytes, with DNA binding domain (DBD) on the N-terminal side and Hinge domain (LBD) on the C-terminal side. PB, exogenous foreign matter (foreign matter function) and unknown intrinsic matter (classification) are perceived as nuclear migration, RXR and target gene formation, target gene upstream position, binding and activation. This phenomenon, the migration from the cytoplasm to the nucleus, is an important factor in the activation of writing in CAR. CAR development in cultured cell lines is observed in vitro, in vivo, and in vitro. This is the first time that CAR has been used in cell culture for nuclear migration of CAR (NLS1,NLS2)(Biochem Biophys Acta.2005 1745 215-222). It is now known that cytoplasm, which communicates with the nucleus, regulates the role of Nuclear localization signals (NLS) and Nuclear export signals (NES). The FRAP assay is used to detect the presence of CAR in cultured cell lines, and CAR is used to detect the presence of CRM1-dependent NES. NLS's function is different from CAR's function. The NLS and PB-dependent NLS are shown in XRS, but the NLS function is not shown in XRS, and the NLS2 function is regulated by acid substitution. The possibility of CAR nuclear migration regulation is shown.

项目成果

The inhibitory effect of aryl hydrocarbon receptor repressor (AhRR) on the growth of human breast cancer MCF-7 cells

• DOI: 10.1248/bpb.29.1254
• 发表时间: 2006-06-01
• 期刊: BIOLOGICAL & PHARMACEUTICAL BULLETIN
• 影响因子: 2
• 作者: Kanno, Yuichiro;Takane, Yusuke;Inouye, Yoshio
• 通讯作者: Inouye, Yoshio

Characterization of nuclear localization signals and cytoplasmic retention region in the nuclear receptor CAR

• DOI: 10.1016/j.bbamcr.2005.06.012
• 发表时间: 2005-09-10
• 期刊: BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA-MOLECULAR CELL RESEARCH
• 影响因子: 5.1
• 作者: Kanno, Y;Suzuki, M;Inouye, Y
• 通讯作者: Inouye, Y

Primary structure and organ-specific expression of the rat aryl hydrocarbon receptor repressor gene

• DOI: 10.1248/bpb.29.640
• 发表时间: 2006-04-01
• 期刊: BIOLOGICAL & PHARMACEUTICAL BULLETIN
• 影响因子: 2
• 作者: Nishihashi, H;Kanno, Y;Inouye, Y
• 通讯作者: Inouye, Y

Expression of Constitutive Androstane Receptor Splice Variants in Rat Liver and Lung and Their Functional Properties

组成型雄甾烷受体剪接变体在大鼠肝和肺中的表达及其功能特性

• 发表时间: 2005
• 期刊: Biological & Pharmaceutical Bulletin 28
• 作者: Kanno Y;Suzuki M;Miyazaki Y;Matsuzaki M;Nakahama T;Kurose K;Sawada J;Inouye Y.;Yuichiro Kanno;Yuichiro Kanno
• 通讯作者: Yuichiro Kanno

Difference in nucleocytoplasmic shuttling sequences of rat and human constitutive active/androstane receptor

• DOI: 10.1016/j.bbamcr.2007.03.020
• 发表时间: 2007-06-01
• 期刊: BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA-MOLECULAR CELL RESEARCH
• 影响因子: 5.1
• 作者: Kanno, Yuichiro;Suzuki, Motoyoshi;Inouye, Yoshio
• 通讯作者: Inouye, Yoshio