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転写因子STATサプレッサー遺伝子の機能解析

转录因子STAT抑制基因的功能分析

基本信息

批准号：
05J02751
负责人：
島田奈央
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Toho University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05J02751/
关键词：
遺伝子シグナル伝達進化発生・分化

项目摘要

本年度は、前年度に引き続きDd-STATaサプレッサー遺伝子であるDd-CH1(SunB)、NK20遣伝子の解析を進めた。sunB遺伝子は、Ax2株ではゲノム上に2コピー存在すると考えられたことから遺伝子破壊が困難であったが、KAx3株を親株として用いた結果、sunBの発現が1/50に低下したsunBノックダウン株を得ることに成功した。sunBノックダウン株は、細胞質分裂の異常と予定柄細胞であるtipを多数もつmultiple tipsという表現型を示し、予定柄細胞の一部であるpstAB細胞マーカー遣伝子の発現上昇がみられた。このことからSunBは増殖と細胞分化の両方への関与することが示された。sunBサプレッサー株中では、pstAB細胞マーカー遺伝子の発現上昇がみられたが、リン酸化STATa量に変化はみられなかった。このことからSunBはSTATaに直接作用していないと考えられた。前年度作製した抗SunB抗体を精製し免疫組織化学染色を行った結果、SunBタンパク質は、移動体後期後半では予定柄細胞で消失し予定胞子細胞のみで局在がみられた。一方、Dd-STATa部分破壊株ではSunBタンパク質が予定柄細胞でもみられることからDd-STATaがSunBタンパク質の分解に必要である可能性が示唆された。以上の結果の一部は2007年9月にドイツで開催された国際細胞性粘菌学会で発表を行った。NK20サプレッサー株ではリン酸化GFP::STATa(core)量やDd-STATa標的候補遺伝子の発現量は一定であった。このことからNK20はDd-STATaを直接介さないで子実体形成に機能していると考えられた。NK20遺伝子はセリンとグリシンに富んだ93アミノ酸からなる小さなタンパク質をコードし、翻訳されうることが確認されていた。しかし、NK20遺伝子にフレームシフト変異を導入したコンストラクトを過剰発現させた場合もサプレッションが起きた。また組織特異的プロモーターを用いてNK20を過剰発現させたところ、予定柄細胞特異的プロモーターを用いた場合のみサプレッションが起きた。このことから、サプレッションにはNK20の翻訳は不要で、細胞組織特異的発現が必要であると考えられた。NK20の解析の結果については論文としてまとめ公表した(発表論文3)。

In the current year and the previous year, we have introduced the Dd-CH1 (SunB) and NK20 sub-analysis of the current year and the previous year. The results of sunB, Ax2, sunB and sunB showed that they were lower than 50%. The results showed that there were significant differences between the two groups. The results showed that there was a significant difference between the two groups. The cell division of the sunB plant, the cell division, the predetermined stalk, the tip, the majority, the multiple tips, the table, the pstAB, the cell, the cell. The SunB colonies were divided into two groups: cell differentiation, cell differentiation and cell differentiation. In the sunB plant, the cells of pstAB and pstAB cells were isolated from the plant. Now, the cells of the plant have been acidified and acidified STATa. The direct effect of "SunB" STATa is the direct effect of "exam". In the previous year, the results of anti-SunB antibody sperm immunocytochemical staining, the results of SunB immunocytochemical staining, and the disappearance of the predetermined stalk in the second half of the later stage of the migration were determined. On the other hand, the Dd-STATa partially broke the plant, SunB, SunB, cell, Dd-STATa, SunB, decomposition, necessary, possibility, possibility, and so on. As a result of the above results, a review of the International Society of Cellular Myxomycetes was launched in September 2007. The amount of NK20 that acidified GFP::STATa (core) must be higher than that of Dd-STATa. We need to NK20 the Dd-STATa to directly introduce the formation of sub-bodies in order to improve the quality of life. The NK20