バイオアフィニティを利用したタンパク質吸着特性の解析と新規定化法の開発

利用生物亲和力分析蛋白质吸附特性并开发新的调控方法

• 批准号: 05J03552
• 负责人: 熊田 陽一
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05J03552/
• 关键词: PS-tag; Polystyrene; ELISA; Protein-protein interaction; One-step ELISA; Phage display system; 国際研究者交流; オーストリア共和国; バイオアフィニティ; タンパク質の配向制御; ポリスチレン; ポリスチレン親和性ペプチド; 酵素免疫測定; 抗原-抗体反応; タンパク質相互作用; プロテインチップ

本研究では、タンパク質の固体表面への吸着メカニズムを明らかにするとともに、タンパク質固定化基盤を用いた様々なバイオプロセスへの応用について検討を行ってきた。特に今年度は、本研究でスクリーニングされたポリスチレン親和性ペプチド(PS-tag)を利用した迅速な免疫測定法・タンパク質間相互作用解析法の開発を中心に研究を進めた。すなわち、PS-tagを遺伝子的にタンパク質の末端に融合、または化学的に表面に修飾することで、高濃度の夾雑タンパク質存在下においても選択的に目的タンパク質をポリスチレン表面に固定化できることを明らかにした。この現象を利用して一段階のインキュベートおよび洗浄操作で目的タンパク質の定量的な検出が行えるOne-step ELISA法を開発した。その結果、従来法と同程度の検出感度を維持したままで、免疫測定における操作時間を最大で従来の10分の1に短縮することができた。また、これらの基本概念をタンパク質間相互作用の解析に応用したところ、ポリスチレン表面におけるリガンドタンパク質の変性を著しく改善でき、非常に高い感度およびシグナル強度で目的タンパク質の特異的な相互作用を検出することに成功した。これらの研究成果を基に、ウィーン農業大学においてランダムペプチドライブラリ中からの目的タンパク質に特異的なペプチドのスクリーニングに関する研究を行い、研究成果についてディスカッションを行った。

In this study, the adsorption of solid surface particles on solid substrates was investigated. In particular, this study is intended to advance the development of a rapid immunoassay for the analysis of mass-to-mass interactions (PS-tag). In the presence of high concentration of P-tag molecules, the target molecules are immobilized on the surface. This phenomenon was developed using a One-step ELISA for quantitative detection of the target protein. Results: The sensitivity of the assay was maintained at the same level as that of the test, and the operating time of the immunoassay was shortened by 10 minutes. The basic concept of mass-to-mass interaction analysis was successfully applied to improve the quality of surface materials, especially to improve the sensitivity and intensity of mass-to-mass interaction analysis. The research results are based on the research results of Agricultural University. The research results are based on the research results of Agricultural University.

项目成果

Protein-protein interaction analysis using an affinity peptide tag and hydrophilic polystyrene plate.

• DOI: 10.1016/j.jbiotec.2006.09.018
• 发表时间: 2007-02
• 期刊: Journal of biotechnology
• 影响因子: 4.1
• 作者: Y. Kumada;Chun-hui Zhao;Ryota Ishimura;H. Imanaka;K. Imamura;K. Nakanishi

Development of a one-step ELISA method using an affinity peptide tag specific to a hydrophilic polystyrene surface

• DOI: 10.1016/j.jbiotec.2006.07.011
• 发表时间: 2007-01-01
• 期刊: JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
• 影响因子: 4.1
• 作者: Kumada, Yoichi;Katoh, Shigeo;Nakanishi, Kazuhiro
• 通讯作者: Nakanishi, Kazuhiro

Polypeptide linlers for efficient production of dimeric scFv in Escherichia coli

用于在大肠杆菌中高效生产二聚体 scFv 的多肽连接体

• 期刊: Biochemical Engineering Journal (掲載予定)(確約有)
• 作者: Takemasa M;Matsuda R;Nishinari K;Takahashi R;Yoichi Kumada
• 通讯作者: Yoichi Kumada

Epitope screening by use of a random peptide-displayed phage library and polyclonal antibody-coupled liposomes

使用随机肽展示噬菌体文库和多克隆抗体偶联脂质体进行表位筛选

• 发表时间: 2006
• 期刊: Journal of Chemical Engineering of Japan 39・11
• 作者: Akiko Kubo;Yoshiaki Yuguchi;Makoto Takemasa;Shiho Suzuki;Hikaru Satoh;Shinichi Kitamura;越後 典子;Yoichi Kumada;Makoto Takemasa;Yoichi Kumada
• 通讯作者: Yoichi Kumada

Screening and characterization of affinity peptide tags specific to polystyrene supports for the orientated immobilization of proteins

• DOI: 10.1021/bp050331l
• 发表时间: 2006-03-01
• 期刊: BIOTECHNOLOGY PROGRESS
• 影响因子: 2.9
• 作者: Kumada, Y;Tokunaga, Y;Nakanishi, K
• 通讯作者: Nakanishi, K