PS-tagを用いるOne-stepタンパク質間相互作用検出システムの開発

使用PS-tag开发一步式蛋白质-蛋白质相互作用检测系统

• 批准号: 19860042
• 负责人: 熊田 陽一
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Kyoto Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19860042/
• 关键词: Polystyrene binding peptide; polystyrene; protein immobilization; hydrophilic polystyrene plate; cysteine synthase complex

本研究課題では、プロテオーム解析におけるタンパク質の機能解析の支援技術として、独自に開発したポリスチレン親和性ペプチド(PS-tag)を利用した迅速かつ高感度なタンパク質問相互作用検出システムを開発することを目的とした。リガンドタンパク質であるOASSのC末端にPS-tagを遺伝子融合したOASS-C-PS-tagを組換え大腸菌にて発現し、野生型OASSと同様な方法で精製した。また、野生型OASSの表面にPS-tagを2価性架橋剤によってランダムに標識したOASS-R-PS-tagを調製した。3種類のリガンドタンパク質のPSプレートへの固定化量、配向性、および安定性を比較した。ところ、PS-tagを融合または標識されたOASS-C-PS-tagおよびOASS-R-PS-tagは親水性PS plate上に安定かつ高密度に固定化できることが明らかとなった。さらに、Serine Acetyltransferase(SAT)との相互作用を検出したところ、OASS-C-PS-tagおよびOASS-R-PS-tagを固定化したPS plateから強いシグナルが得られた。したがって、PS-tagをリガンドタンパク質に融合または標識することでタンパク質間相互作用をin vitroで高感度に検出できることが明らかとなった。

The purpose of this study is to develop a support technology for qualitative functional analysis of a high-sensitivity interactive query by utilizing a unique affinity tag (PS-tag). OASS C-terminal PS-tag fusion, OASS-C-PS-tag assembly, E. coli development, wild-type OASS purification, and the like. The PS-tag of wild-type OASS is modulated by a two-dimensional bridge. The immobilization amount, alignment, stability of the three kinds of PS molecules were compared. OASS-C-PS-tag and OASS-R-PS-tag are fused and immobilized on a hydrophilic PS plate. The interaction between Serine Acetyltransferase(SAT) and OASS-C-PS-tag and OASS-R-PS-tag was immobilized on PS plate. The PS-tag is a high-sensitivity interaction in vitro.