分裂酵母におけるRad51依存的な遺伝的組換え反応の分子機構

裂殖酵母Rad51依赖性基因重组反应的分子机制

• 批准号: 05J03468
• 负责人: 高橋 奈美 (春田 奈美)
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Osaka University (2006-2007)Yokohama City University (2005)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05J03468/
• 关键词: DNA修復; Rad51; Rad55; Rad57; 相同組換え; 分裂酵母; Sfr1; Swi5; DNA修複; 生化学

分裂酵母における相同組換え反応のメカニズムを解明するために、Rad51のアクセサリータンパク質であるSwi5-SfrlとRad55-Rad57の複合体について解析を行った。相同組換えの中心的な役割を果たすRad51は、DNA鎖交換反応を行う。Sfrl/Swi5複合体の存在下では、Rad51タンパク質のATP加水分解活性および鎖交換反応活性が顕著に促進されることを、試験管内再構成による反応系でこれまで示してきた。本年度はRad51のもう一つのアクセサリータンパク質であるRad55-Rad57に焦点をあてて研究を進めた。Rad55,Rad57は単独での発現および大腸菌での発現は、不溶性画分になったが、昆虫細胞において共発現することで可溶性になった。そこで、数段階のクロマトグラフィーを組み合わせて複合体として精製することができた。精製したタンパク質複合体は、免疫沈降法によってRad51と物理的な相互作用があることを示した。しかし、予想されたATP加水分解活性やDNA結合活性は認められなかった。この精製したRad55-Rad57をRad51のDNA鎖交換反応に加えたが、反応の顕著な促進は見られなかった。しかし、Swi5-Sfrl存在下でのRad51の反応は、Swi5-Sfrlの等量のRad55-Rad57によって阻害を受けたことから、二つのアクセサリータンパク質が拮抗してRad51に働いている可能性も示唆された。

Split yeast に お け る in same group え anti 応 の メ カ ニ ズ ム を interpret す る た め に, Rad51 の ア ク セ サ リ ー タ ン パ ク qualitative で あ る Swi5 - Sfrl と Rad55 - Rad57 の complex に つ い analytical line を っ て た. The な division of the same group exchange え <s:1> center yields を results たすRad51, and the DNA lock exchange reverses 応を rows う. Sfrl/Swi5 complex の presence で は, Rad51 タ ン パ ク qualitative の ATP hydrolysis activity お よ び lock exchange activity against 応 が 顕 に advancement さ れ る こ と を, test tube to constitute に よ る anti 応 department で こ れ ま で shown し て き た. This year's は Rad51 の も う a つ の ア ク セ サ リ ー タ ン パ ク qualitative で あ る Rad55 - Rad57 に focus を あ て を て research into め た. Rad55, Rad57 は 単 alone で の 発 now お よ び coliform で の 発 は, insoluble draw points に な っ た が, insect cell に お い て 発 now total す る こ と で soluble に な っ た. そ こ で, several Duan Jie の ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー を group み close わ せ て complex と し て refined す る こ と が で き た. Refined <s:1> たタ パ パ the な interaction of the embryonic complex た and immunoprecipitation によってRad51と physics がある がある とを shows that た た. Youdaoplaceholder0 ATP water decomposition activity やDNA binding activity believe められな った った. こ の refined し た Rad55 - Rad57 を Rad51 の DNA lock exchange the 応 に plus え た が, anti 応 の 顕 な advancement は see ら れ な か っ た. し か し, presence of Swi5 - Sfrl で の Rad51 の anti 応 は, Swi5 Sfrl の equivalent の Rad55 - Rad57 に よ っ て resistance against を by け た こ と か ら, two つ の ア ク セ サ リ ー タ ン パ ク qualitative が antagonism し て Rad51 に 働 い て い も る possibility in stopping さ れ た.

项目成果

相同組換えのメディエーター

同源重组的介体

• 发表时间: 2007
• 期刊: 生化学 79
• 作者: Y. kurokawa;et. al.;春田(高橋)奈美
• 通讯作者: 春田(高橋)奈美

The Swi5-Sfr1 complex stimulates Rhp51/Rad51 - and Dmcl-mediated DNA strand exchange in vitro

Swi5-Sfr1 复合物在体外刺激 Rhp51/Rad51 和 Dmcl 介导的 DNA 链交换

• 发表时间: 2006
• 期刊: Nature Structural and Molecular Biology 13
• 作者: N Haruta;et al.
• 通讯作者: et al.

Reconstitution of DNA strand exchange mediated by Rhp51 recombinase and two mediators

• DOI: 10.1371/journal.pbio.0060088
• 发表时间: 2008-04-01
• 期刊: PLOS BIOLOGY
• 影响因子: 9.8
• 作者: Kurokawa, Yumiko;Murayama, Yasuto;Iwasaki, Hiroshi
• 通讯作者: Iwasaki, Hiroshi