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Rad51のアクセサリータンパク質群による相同組換え反応の制御メカニズム

Rad51辅助蛋白对同源重组反应的控制机制

基本信息

批准号：
08J40066
负责人：
高橋奈美 (春田奈美)
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Tohoku University (2011)Osaka University (2008-2010)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2011
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08J40066/
关键词：
rad51 BRCA1 c. elegans γ-tubulin DNA修復相同組換え Rad51 酵母 Rad55 Rad57 分裂酵母

项目摘要

今年度より線虫C.elegansをモデル生物として用いて、rad51に関連するタンパク質の一つとしてBRCA1のホモログであるBRC-1についての解析を進めてきた。BRCA1は、ヒトの乳がん原因遺伝子の一つとしてBRCA2とともに同定されたが、BRCA2がRad51のメディエーター機能が明らかにされる一方、BRCA1の役割ははっきりしていない。しかし、Rad51と直接相互作用することから、相同組換えに関与していることが示唆されている。そこで私は、BRCA1/BRC-1の機能を明らかにするために、BRC-1とその結合タンパク質であるBARD1/BRD-1、さらにヒトで相互作用が確認されたOLA1/OLA-1について解析を行った。成虫になる前のL4幼虫の段階でRNAiソーキング法を用いて、それぞれのmRNAを破壊してその表現系解析を行った。その結果、RNAi処理した成虫が産んだ卵の致死率は0%で、ほとんど影響はなかった。しかし、その産卵数は、BRC-1,BRD-1,0LA-1がいずれにおいてもコントロールに比べて減少していたことから、卵形成過程で何らかの影響を及ぼしていることが示唆された。現在、そのメカニズムについてRad-51の表現系とも比較しながら詳細に検討を進めている。また線虫を用いて、染色体が正しく分配されるのに必要な紡錘体微小管形成についても新たな研究を展開した。Γ-tubulinは、微小管形成に必須のタンパク質であるが、GCPタンパク質と呼ばれるいくつかのタンパク質と複合体を形成する。当研究室で同定された新規タンパク質GTAP-1とGTAP-2が、Y-tubulinと直接結合することをYeast two-hybrid法やバキュロウィルス発現系を用いた再構成系で示し、またショ糖密度勾配法を用いて、これらのタンパク質がY-tubulin複合体の新規構成因子であることを示した。

This year's C. elegans nematode C. elegans biotech is used and rad51 is related.パク性の一つとしてBRCA1のホモログであるBRC-1についてのanalytic を入めてきた. BRCA1は、ヒトの乳がんcaution伝子の一つとしてBRCA2とともに同定されたが、BRCA2がRad51のメディエーターfunctionalityが明らかにされる一party, BRCA1の丯っきりしていない.しかし、Rad51とdirect interaction することから、the same combination of えに关 and していることがshows instigation されている.そこでprivateは、BRCA1/BRC-1のfunctional を明らかにするために、BRC-1とそのcombination quality であるBARD1/BRD-1, さらにヒトでinteraction confirmationされたOLA1/OLA-1についてanalyticsを行った. Adult larvae L4 larvae stage でRNAi ソーキング法を Use いて, それぞれのmRNAを壊してそのexpression system analysis を行った. As a result, the lethality rate of adults and eggs produced by RNAi treatment was 0%, and the effect of RNAi treatment was zero. The number of eggs laid, BRC-1, BRD-1, 0LA-1, and the number of eggs laid The に than the べて reduces the していたことから, the egg formation process is affected by the でらかの, and the ぼしていることが Shows the された. Now, the performance system of Rad-51 Rad-51 is compared with the detailed one. Nematode nematodes use いて, chromosome がpositive しくdistribution されるのにnecessary spindle microtubule formation についても新たな research をdevelopment した. Γ-tubulin, microtubule formation is necessary for the formation of complexes, and GCP is necessary for the formation of complexes. When the laboratory has determined the new regulations of GTAP-1 and GTAP-2, Y-tubulin is directly combined with Yeast The two-hybrid method is used to reconstitute the system and sugar density blending system The method uses the new rules of the Y-tubulin complex and the new rules of the Y-tubulin complex.