消化器癌の発生に関わるヘッジホッグ経路のエピジェネティクな制御機構の解析

Hedgehog通路参与胃肠道肿瘤发生发展的表观遗传调控机制分析

• 批准号: 05J05135
• 负责人: 渡邉 すぎ子
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05J05135/
• 关键词: 消化器癌; Sonic Hedgehog; 遺伝子; 発現制御; クロマチン; 発生分化

1)消化器癌細胞株におけるSonic Hedgehog ; ShhおよびShhシグナル経路の発現検討RT-PCRによりShhおよびShhシグナル分子のmRNAを、またShhに対する特異的抗体を用いたWestern blot法および免疫染色法によりタンパク質の発現を解析したところ、多くの細胞株でShhやそのシグナル経路の発現を認めた。2)Shh過剰発現による細胞制御機構の解析ShhをPCR法にてクローニングし、Shh発現ベクターを作成した。各種消化器癌細胞株にShh発現ベクターを遺伝子導入し、細胞形態や細胞増殖能の変化を観察したところ、明らかな変化は認められなかった。3)Shhのプロモーター領域の解析Shhのプロモーター領域の配列をゲノムよりPCR法にてクローニングした。消化器癌にて高発現がみられるクロマチン結合因子のShhプロモーターへの結合性を、in vitroにおいてバンドシフト法で、in vivoにおいてクロマチン免疫沈降で検出した。またShhのプロモーター領域を含むルシフェラーゼベクターを作成し、ルシフェラーゼアッセイによりそのプロモーター活性を検出した。4)クロマチン結合因子とShh発現量の関連性消化器癌細胞株においてクロマチン結合因子をsiRNA導入によりノックダウンし、特異的抗体を用いたWestern blot法によりそのノックダウン効果を定量した。さらにクロマチン結合因子ノックダウンによるShh発現量の変化をreal time RT-PCRや特異的抗体を用いたWestern blot法により定量したところ一部に変化がみられた。

1) Digestive cancer cell line におけるSonic Hedgehog; Shh お よ び Shh シ グ ナ ル 経 road の 発 検 now for rt-pcr に よ り Shh お よ び Shh シ グ ナ ル molecular の mRNA を, ま た Shh に す seaborne を る specific antibody with い た Western Blot method お よ び immune staining に よ り タ ン パ ク qualitative の 発 now を parsing し た と こ ろ, multiple く の cell lines で Shh や そ の シ グ ナ ル 経 road の 発 を now recognize め た. 2) Shh turning 発 now に よ る cell system of the royal institution の parsing Shh を PCR method に て ク ロ ー ニ ン グ し, Shh 発 now ベ ク タ ー を made し た. Various digesters cancer cells に Shh 発 now ベ ク タ ー を heritage 伝 import し, cell morphology や rights can yield の variations change を 観 examine し た と こ ろ, Ming ら か な variations change は recognize め ら れ な か っ た. 3) Shh の プ ロ モ ー タ ー field analytical Shh の の プ ロ モ ー タ の ー field match column を ゲ ノ ム よ り PCR method に て ク ロ ー ニ ン グ し た. High digesters carcinoma に て 発 now が み ら れ る ク ロ マ チ ン combination factor の Shh プ ロ モ ー タ ー へ の associativity を, the in vitro に お い て バ ン ド シ フ ト で, in vivo に お い て ク ロ マ チ ン immune sink で 検 out し た. ま た Shh の プ ロ モ ー タ ー field contains を む ル シ フ ェ ラ ー ゼ ベ ク タ ー を し, consummate ル シ フ ェ ラ ー ゼ ア ッ セ イ に よ り そ の プ ロ モ ー タ ー active を 検 out し た. 4) ク ロ マ チ ン combination factor と Shh 発 amount is の masato even sex digesters cancer cells に お い て ク ロ マ チ ン combination factor を siRNA import に よ り ノ ッ ク ダ ウ ン し, specific antibody を い た Western blot method に よ り そ の ノ ッ ク ダ ウ ン unseen fruit を quantitative し た. さ ら に ク ロ マ チ ン combination factor ノ ッ ク ダ ウ ン に よ る Shh 発 amount is の variations change を real time rt-pcr を や specific antibody with い た Western blot method に よ り quantitative し た と こ ろ a に variations change が み ら れ た.

项目成果

構造的クロマチン因子-遺伝子発現とゲノム安定性の調節-

结构染色质因子 - 基因表达和基因组稳定性的调节 -

• 期刊: 実験医学 (印刷中)
• 作者: 高野大樹;ファンダンホア;大谷順;高野 大樹;高野 大樹;杉島 正一;萩原 義徳;杉島 正一;萩原 義徳;杉島 正一;坂本 寛;井上 浩義;Kazuya Tanaka;Kazuya Tanaka;田中 万也;Kazuya Tanaka;Kazuya Tanaka;田中 万也;田中 万也;Ichimura T;渡邉 すぎ子
• 通讯作者: 渡邉 すぎ子

Transcriptional repression and heterochromatin formation by MBD1 and MCAF/AM family proteins

• DOI: 10.1074/jbc.m413654200
• 发表时间: 2005-04-08
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Ichimura, T;Watanabe, S;Nakao, M
• 通讯作者: Nakao, M