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皮質脊髄路シナプスの発達と可塑性

皮质脊髓束突触的发育和可塑性

基本信息

批准号：
05J06467
负责人：
大野孝恵
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Teikyo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05J06467/
关键词：
corticospinal synapse knockout mice GluR ε 2 containing NMDA receptor heterotypic co-culture optical imaging whole cell recording synapse elimination slice culture GluRε2 containing NMDA receptor single neuron tracing 共培養 NMDA受容体皮

项目摘要

今までにラットで示してきたin vitro皮質脊髄路シナプスのNMDA依存的消退過程のメカニズムを明らかにするため、同過程をマウスで再現し、GluRε2(NR2B)knockout(ε2^<-/->)mouseを導入することにより、皮質脊髄路における発達期のシナプス除去過程が、脊髄側のGluRε2に依存している事を明らかにし、その結果を論文化した。(1)培養液中にGluRε2特異的阻害剤であるifenprodilを添加するとAPV同様シナプス除去過程が阻害されたことから、この過程がGluRε2依存性であることが示唆された。(2)Wild type(WT)とε2^<-/->mouse由来のスライスを共培養するheterotypic co-cultureにおいて、皮質WT-脊髄ε2^<-/->の組み合わせではシナプス除去過程が阻害されたのに対して、皮質ε2^<-/->-脊髄WTの組み合わせでは阻害されなかったことから、シナプス除去過程には脊髄側のGluRε2が関与していることが明らかになった。以下の異なる手法を用いて皮質WT-脊髄ε2^<-/->と皮質ε2^<-/->-脊髄WTとの相違を確認した。1)細胞外記録(field EPSP)及びホールセル記録(EPSC)により腹側におけるシナプス除去過程を観察した。2)biocytinを用いた順行性標識によりシナプス終末の分布を観察した。3)膜電位感受性色素による光学的記録によりシナプス電位の空間分布を観察した。(3)ε2^<-/->mouseにおいても、培養7日目の脊髄スライスには、NMDA受容体が発現していることを阻害剤を用いた薬理学的実験に加えNMDA EPSCを記録することにより確認した。

This paper shows that the NMDA dependent regression process of cortical spinal pathway in vitro is characterized by its reproduction, GluRε2(NR2B)knockout(ε2^<-/->)mouse is introduced into the cortical spinal pathway, and the NMDA dependent regression process of cortical spinal pathway in vitro is characterized by its dependence on GluRε2. (1)GluR ε2-specific inhibitors are added to the culture medium, and APV isoforms are removed. (2)Wild type(WT): ε2^<-/->mouse origin: GluR ε2^<-/->mouse origin: GluR ε2 ^<-> mouse origin: GluRε2^<-> The following different techniques are used to confirm the correlation between WT-2^<-/-> and WT-2^<-/-> 1)The removal process of extracellular recordings (field EPSP) and extracellular recordings (EPSC) in the ventral region was observed. 2) The distribution of biocytin in anterograde markers was observed. 3)The spatial distribution of membrane potential is observed by optical recording of membrane potential sensitive pigments. (3)2^<-/->mouse, 7 days of culture, NMDA receptor, NMDA receptor.