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ヒト子宮内膜幹細胞の同定・分離・培養の試み

尝试鉴定、分离和培养人类子宫内膜干细胞

基本信息

批准号：
05J08123
负责人：
升田博隆
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

1、子宮内膜幹細胞の同定・分離従来の他臓器幹細胞マーカーを用いた検索では、CD34は主に血管内皮細胞が陽性となり、CD133は主に上皮細胞が陽性になっており、CD177,Musashi-1等の結果からも子宮内膜幹細胞候補が組織上明らかな局在を示しているとは言いがたかった。子宮内膜細胞のSP/MP解析では、間質細胞・腺細胞ともにSP分画の存在を明らかにし、その定義であるABCtransporterのblocker(recerpine)投与によるSP分画の消失も確認した。また、このSP細胞は月経を有する女性では年齢を問わず全月経周期を通して存在し、常に安定してSP細胞を分離する方法を確立した。EP剤使用症例でもSP分画は存在するが、GnRHアンタゴニスト使用症例の子宮では内膜細胞が少ないことから再現性を持つデータを取ることが難しかった。2、子宮内膜SP細胞の幹細胞活性の確認移植実験では、SP移植部位に腺上皮と間質からなる腺管構造を有した子宮内膜様組織の再構築が認められ、その組織では内膜固有の機能特性のひとつであるプロゲステロン受容体の発現が認められた。また、内膜様腺管構造をとらなかった検体の検索しより3種類の特徴的な免疫組織化学染色所見が得られ、Endothelia-vessel type, Endothelial-invasion type, Stromal typeと分類した。この3分類の出現率はSP移植群とMP移植群で差が出ており、検討中である。SP細胞はどの臓器においても培養は困難であったが、SP細胞とMP細胞をそれぞれDiIとDiOで染色し共培養することでSP細胞のin vitroでの増殖を確認した。今後、増殖因子等を検討しSP細胞の単独培養を目指す。3、SP細胞とMP細胞との遺伝子発現解析DNAマイクロアレイを用いたSP細胞とMP細胞との発現遺伝子の比較(ANOVA-FDR解析)では、SP細胞で優位に発現が高かった遺伝子は72個存在し、そのうち56遺伝子の機能が判明しており、シグナル伝達系やトランスポーターにかかわる遺伝子が多かった。発現の強い上位からP-glycoprotein (MDR1), VEGFR II (KDR), PECAM-1, breast cancer resistance protein (BCRP), thrombomodulin, cadherin5と続き、比較的血管内皮に発現が高いものが多かった。

1. Endometrial stem cell identification, isolation, and other organ stem cell identification, CD34, CD133, CD177,Musashi-1, etc. SP/MP analysis of endometrial cells, stromal cells, glandular cells, SP analysis of the existence of clear, clear definition of ABCtransporter blocker(recerpine), and SP analysis of the absence of clear, clear definition of ABCtransporter blocker(recerpine). The method of separating SP cells from each other is established. EP use cases, SP classification, and the presence of GnRH, GnRH, and GnRH use cases, endometrial cells, and reproducibility. 2. Confirmation of stem cell activity of endometrial SP cells Transplantation process: The structure of glandular epithelium and stroma in SP transplantation site has been reconstructed into endometrial tissue, and the inherent functional characteristics of endometrial tissue have been identified. Three types of features were identified by immunohistochemical staining: Endothelia-vessel type, Endothelial-invasion type, Stromal type. The occurrence rate of these three categories is different from that of SP transplant group and MP transplant group. SP cells were cultured in vitro and SP cells were cultured in vitro. In the future, growth factors and other factors will be discussed and SP cells will be cultured separately. 3, SP cells and MP cells and gene expression analysis of DNA from SP cells and MP cells (ANOVA-FDR analysis), SP cells and MP cells in the optimal position of the gene expression of 72 exist, and the function of the gene is identified. P-glycoprotein (MDR1), VEGFR II (KDR), PECAM-1, breast cancer resistance protein (BCRP), thrombomodulin, cadherin5 and more vascular endothelial cells were detected.