遺伝子改変マウスを用いた生殖細胞の性分化の解析

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平成18年度は、平成17年度にDNAマイクロアレイの結果より見出した、XX型プロ精原細胞とXY型プロ精原細胞との間で顕著に差が見られた遺伝子について、精算細胞における遺伝子の機能ついて研究を行った。まず、誕生後に増殖せずに消滅してしまうXX型プロ精原細胞で、顕著に増加していた11種類の遺伝子の機能を明らかにするために、遺伝子のクローニングを行った。これらの中でNCBIデータベースの検索によって、ORF配列が決定されている7種類の遺伝子のうち、6種類のクローニングに成功した。そしてこれら、クローニングに成功した遺伝子について、精原細胞における遺伝子機能を明らかにするために、精原細胞を多く含む1週令の精巣からGS細胞(germlinestem cells)の樹立を行った。また、遺伝子が導入された細胞が分かるようにマーカー蛋白質であるEGFPを共発現するようにベクターを構築した。そして、樹立したGS細胞にリポフェクションを用いて、6種類の遺伝子それぞれを発現させた。リポフェクション後、48時間後に培地中にBrdUを投与し、それから12時間後にBrdUの取り込みについて、フローサイトメーターを用いて解析を行った。その結果、遺伝子が発現していると思われるEGFPで標識された細胞において、BrdUの取り込みが確認された。以上の結果より、GS細胞ではXX型プロ精算細胞で顕著に増加していた6種類が単独で過剰発現しても、発現後48時間後にはまだ、細胞増殖能があることを示した。このことはクローニングできた6種類の遺伝子が単独で精原細胞の増殖を抑制しているわけではないことが示唆された。