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マウスを用いた新規軸糸構成タンパク質Rib72の機能解析

使用小鼠对新型轴丝蛋白 Rib72 进行功能分析

基本信息

批准号：
05J11438
负责人：
池田隆
金额：
$ 1.15万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05J11438/
关键词：
マウスクラミドモナス鞭毛・繊毛周辺微小管 Rib72 Efhcl PACRG NDK7 軸糸ネキシンリンク Efhc1

项目摘要

真核生物の鞭毛・繊毛軸糸の基本構造は、進化的によく保存されている。軸糸構造の保持に重要と考えられるRib72は、周辺微小管同士をつなぎとめている分子組成が不明なネキシンリンクと関連をもっているのではないかと推測されている。またこの蛋白質は周辺微小管内部の安定な構造に存在していることから周辺微小管の構築にも重要であると考えられる。本研究ではマウスのRib72ホモログと相互作用する蛋白質を同定すると同時に、運動性の鞭毛・繊毛を持つ真核生物によく保存され、DM10と呼ばれるドメインをRib72以外で唯一持つNDK7の研究を行うことによりRib72の機能に迫ろうとした。昨年度までにRib72結合蛋白質候補としてPACRGというトリパノソーマでネキシンリンクとの関連が示唆されている蛋白質を同定し、この蛋白質が隣り合う周辺微小管の間に局在することを示していた。本年度はまず、可溶化した軸糸蛋白質に対するPACRG抗体を用いた免疫沈降法によって、Rib72が共沈することを示した。また、バキュロウイルスで発現させたPACRGを用いた研究により、このタンパク質がtubulin dimerや微小管と強く結合し、微小管を束化する性質があることを明らかにした。さらに、マウスおよびクラミドモナスNDK7を認識する特異的抗体を作製し、局在・発現解析を行った結果、この蛋白質が運動性の軸糸を持つ組織に強く発現していることやクラミドモナス及びマウス精子の軸糸全長に存在することがわかった。ところが驚くべきことに気管では大量に発現しているにもかかわらず、繊毛ではなく細胞体に局在していた。また、この蛋白質が微小管と直接相互作用することも明らかにした。本研究ではNDK7とRib72との関係は示されていないが、さらにこの研究をもとに機能解析を進めることにより、Rib72の機能に関するヒントが得られることが期待される。

The flagella of eukaryotes are basically constructed, and the progressive ones are preserved. In order to maintain the importance of Rib72, microtubules and microtubules are composed of molecules that do not know what to do. The microtubule is stable and stable in the periphery. The microtubule is very important. The purpose of this study was to investigate the interaction between Rib72 and Rib72 proteins in eukaryotes. The flagellum of the animals was preserved in eukaryotes, and DM10 was used to study the interaction between proteins. In this study, we studied the interaction between protein and protein in the same time. The flagellum was preserved in eukaryotes, and the Rib72 was used in this study. Last year, the Rib72 binding protein was detected in the PACRG system. The microtubule was detected in the microtubule. This year, PACRG antibodies were detected by immunoprecipitation method and Rib72 co-precipitation method. The purpose of this study is to use the PACRG to study the microtubule, to strengthen the combination of the microtubule and the microtubule, so that the microtubule can be used in the study of the microtubule, the microtubule and the microtubule, the microtubule is strongly combined with the microtubule and the microtubule. In this paper, the results of NDK7 specific antibodies were detected, and the results were analyzed by the computer. The results were analyzed by the computer, and the results were analyzed by the computer. The results showed that there were significant changes in the overall length of the sperm system and the whole length of the sperm system. Please tell me that a large number of people have been shown to be in the hospital. Protein, protein, microtubule, direct interaction, protein, protein, microtubule, and so on. The purpose of this study is to demonstrate that the NDK7 and Rib72 can be analyzed in the field of research and development.