酵母26Sプロテアソームの会合と活性の時間的・空間的制御

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出芽酵母26Sプロテアソームの制御サブユニットを構成する遺伝子であるRPN2,RPN5,RPN7に関して、これまでに単離した温度感受性変異体に関して、制限温度下で検出される中間体の局在を観察した。その結果、制御サブユニットを構成するlidとbaseのふたつのサブユニットはそれぞれ独立に核移行しうることを示した。またインポーティンαの温度感受性変異体即1-49中ではbaseの局在は核から細胞質に拡散するのに対して、hdは制限温度下でも核に局在することを示した。またhd構成因子のうちRpn3,Rpn7,Rpn12,Rpn15が複合体に含まれていないと核移行は生じないことを示した。これらの結果から、26Sプロテアソームを構成するlid, base, CPの各サブユニットは互いに非依存的に形成、核移行できることを明らかにし、lidの核移行に必須な構成因子を示した。また、hdの中で唯一酵素活性を持つ構成因子として同定されているRpnllpと共通の活性ドメインであるMPN+ドメインを有する分子AMSHの解析をシロイヌナズナを用いた系で行った。大腸菌で発現させたシロイヌナズナAMSEはRpnllpと同様、脱ユビキチン化酵素活性を示し、その活性は基質であるユビキチン鎖のチェーンタイプによって異なった。シロイヌナズナAMSHはRpnllpとは異なり、モノマーでも酵素活性を示し、ゲル濾過を行った結果、AMSHは安定な複合体は形成しておらず、主にモノマーで存在することが明らかとなった。またAMSHのホモ欠損植物は著しい生育欠損を示し、葉緑体の分化も見られないことからAMSHによる脱ユビキチン化は植物の発生において必須の機能を担っていると考えられる。