酵母26Sプロテアソームの会合と活性の時間的・空間的制御

酵母 26S 蛋白酶体关联和活性的时间和空间控制

• 批准号: 05J11442
• 负责人: 磯野 江利香
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05J11442/
• 关键词: 出芽酵母; 26Sプロテアソソーム; ユビキチン; バイオジェネシス; タンパク質分解; プロテアソーム; プロテオリシス

出芽酵母26Sプロテアソームの制御サブユニットを構成する遺伝子であるRPN2,RPN5,RPN7に関して、これまでに単離した温度感受性変異体に関して、制限温度下で検出される中間体の局在を観察した。その結果、制御サブユニットを構成するlidとbaseのふたつのサブユニットはそれぞれ独立に核移行しうることを示した。またインポーティンαの温度感受性変異体即1-49中ではbaseの局在は核から細胞質に拡散するのに対して、hdは制限温度下でも核に局在することを示した。またhd構成因子のうちRpn3,Rpn7,Rpn12,Rpn15が複合体に含まれていないと核移行は生じないことを示した。これらの結果から、26Sプロテアソームを構成するlid, base, CPの各サブユニットは互いに非依存的に形成、核移行できることを明らかにし、lidの核移行に必須な構成因子を示した。また、hdの中で唯一酵素活性を持つ構成因子として同定されているRpnllpと共通の活性ドメインであるMPN+ドメインを有する分子AMSHの解析をシロイヌナズナを用いた系で行った。大腸菌で発現させたシロイヌナズナAMSEはRpnllpと同様、脱ユビキチン化酵素活性を示し、その活性は基質であるユビキチン鎖のチェーンタイプによって異なった。シロイヌナズナAMSHはRpnllpとは異なり、モノマーでも酵素活性を示し、ゲル濾過を行った結果、AMSHは安定な複合体は形成しておらず、主にモノマーで存在することが明らかとなった。またAMSHのホモ欠損植物は著しい生育欠損を示し、葉緑体の分化も見られないことからAMSHによる脱ユビキチン化は植物の発生において必須の機能を担っていると考えられる。

Budding yeast 26 s プ ロ テ ア ソ ー ム の suppression サ ブ ユ ニ ッ ト を constitute す る posthumous son 伝 で あ る RPN2, RPN5, RPN7 に masato し て, こ れ ま で に 単 from し た temperature sensitivity - variant に masato し て, limit temperature で 検 out さ れ る intermediates の bureau in を 観 examine し た. そ の results, royal サ ブ ユ ニ ッ ト を constitute す る lid と base の ふ た つ の サ ブ ユ ニ ッ ト は そ れ ぞ れ independent に nuclear migration し う る こ と を shown し た. ま た イ ン ポ ー テ ィ ン alpha の temperature sensitivity - variants that 1-49 で は base の bureau in は nuclear か ら cytoplasm に company, scattered す る の に し seaborne て, hd は system limit temperature で も nuclear に bureau in す る こ と を shown し た. ま た hd constitute factor の う ち Rpn3, Rpn7, Rpn12, Rpn15 が complex contains に ま れ て い な い と nuclear migration は raw じ な い こ と を shown し た. こ れ ら の results か ら, 26 s プ ロ テ ア ソ ー ム を constitute す る lid, base, CP の each サ ブ ユ ニ ッ ト は mutual い に に formation, nuclear migration of non dependent で き る こ と を Ming ら か に し, lid の nuclear migration に be な constitute factor を shown し た. ま た, hd の つ を で only enzyme activity in form factor と し て with fixed さ れ て い る Rpnllp と の common active ド メ イ ン で あ る MPN + ド メ イ ン を have す る molecular AMSH の parsing を シ ロ イ ヌ ナ ズ ナ を with い た line department で っ た. Coliform で 発 now さ せ た シ ロ イ ヌ ナ ズ ナ AMSE は Rpnllp と with others, ユ ビ キ チ ン phenoloxidase activity を し, そ の は active matrix で あ る ユ ビ キ チ ン lock の チ ェ ー ン タ イ プ に よ っ て different な っ た. シ ロ イ ヌ ナ ズ ナ AMSH は Rpnllp と は different な り, モ ノ マ ー で も enzyme activity を し, ゲ ル line filtration を っ た results, AMSH は settle な complex は form し て お ら ず, main に モ ノ マ ー exist で す る こ と が Ming ら か と な っ た. ま た AMSH の ホ モ owe damage plant は the し い fertility owe loss を し, chloroplast の differentiation も see ら れ な い こ と か ら AMSH に よ る ユ off ビ キ チ ン change は plant の 発 raw に お い を bear っ て must の function て い る と exam え ら れ る.

项目成果

ユビキチン-プロテアソーム系とオートファジー

泛素-蛋白酶体系统和自噬

• 发表时间: 2006
• 作者: 佐伯 泰;八代田英樹
• 通讯作者: 八代田英樹

The molecular mechanism of the assembly of the 26S proteasome in yeast.

酵母中26S蛋白酶体组装的分子机制。

• 发表时间: 2006
• 期刊: 蛋白質・核酸・酵素 別冊 51(別冊10)
• 作者: 磯野江利香;東江昭夫
• 通讯作者: 東江昭夫

Knocking out Ubiquitin Proteasome System Function In Vivo and In Vitro with Genetically Encodable Tandem Ubiquitin

利用基因可编码串联泛素在体内和体外敲除泛素蛋白酶体系统功能

• 发表时间: 2005
• 期刊: Methods in Enzymology 399
• 作者: Yasushi Saeki;Erika Isono;Akio Toh-e
• 通讯作者: Akio Toh-e

The assemble pathway of the 19S regulatory particle of the yeast 26S proteasome.

酵母26S蛋白酶体19S调节颗粒的组装途径。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Molecular Biology of the Cell 18(2)
• 作者: 磯野江利香;西原潔;佐伯泰;八代田英樹;鎌田直子;葛黎頴;上田貴志;菊地叔子;田中啓二;中野明彦;東江昭夫
• 通讯作者: 東江昭夫

Preparation of ubiquitinated substrates by die PY motif-insertion method for monitoiring 26S proteasorne activity

通过 PY 基序插入方法制备泛素化底物用于监测 26S 蛋白酶活性

• 发表时间: 2005
• 期刊: Methods in Enzymology 399
• 作者: 佐伯泰;磯野江利香;東江昭夫
• 通讯作者: 東江昭夫