細胞膜結合クニッツ型セリンプロテアーゼインヒビターの生体内機能解明

Hepatocyte growth factor activator inhibitor type 1(HAI-1)は、細胞膜結合クニッツ型セリンプロテアーゼインヒビターであり、HGF activator、matriptase、hepsinなどを標的酵素としている。これまではHGF活性化調節機能が強調されてきたが、生体内での意義については未だ不明な点が多い。本研究ではHAI-1の生体内機能を解析するため、ノックアウトマウスを作成した。HAI-1ホモ欠失マウスは胎盤機能不全で胎生致死となり、HGFやその受容体のノックアウトマウスの表現型より重篤であった。HAI-1がHGF調節機能に加えて予想外の機能を持つことを示唆した。次に成体におけるHAI-1機能を解析するために、胎盤のレスキューを試みた。HAI-1ホモ欠失Es細胞を作成し、野生型マウスの胚盤胞に注入し、キメラマウスを得た。明らかな臓器異常なく出生したが、高キメリズムマウスは発育が悪く、離乳までに死亡した。皮膚過角化か著明で、matriptase強発現マウスに類似しており、HAI-1欠失に伴うmatriptase制御不能が示唆された。死に至る原因を含めて詳細な解析を行っている。さらに、各臓器における機能を解析するために、コンディショナルノックアウトマウスを作成している。現在、loxP配列をHAI-1遺伝子領域に挿入したES細胞のスクリーニングが終了した。HAI-2とその関連因子の腎癌での発現、HAI-2の下流に遺伝子息を持つHAI-2 related smallproteinの大腸癌での発現についても解析し、発表した。また、in vitro実験として、ノックアウトマウス胎仔の初代培養で得られたHAI-1欠失細胞株に二段階遺伝子導入を行い、テトラサイクリン濃度依存性にHAI-1を発現させることに成功した。今後、表現型を解析していく。

Hepatocyte growth factor activator inhibitor type 1(HAI-1)は、細胞膜結合クニッツ型セリンプロテアーゼインヒビターであり、HGF activator、matriptase、hepsinなどを標的酵素としている。これまではHGF活性化調節機能が強調されてきたが、生体内での意義については未だ不明な点が多い。本研究ではHAI-1の生体内機能を解析するため、ノックアウトマウスを作成した。HAI-1ホモ欠失マウスは胎盤機能不全で胎生致死となり、HGFやその受容体のノックアウトマウスの表現型より重篤であった。HAI-1がHGF調節機能に加えて予想外の機能を持つことを示唆した。次に成体におけるHAI-1機能を解析するために、胎盤のレスキューを試みた。HAI-1ホモ欠失Es細胞を作成し、野生型マウスの胚盤胞に注入し、キメラマウスを得た。明らかな臓器異常なく出生したが、高キメリズムマウスは発育が悪く、離乳までに死亡した。皮膚過角化か著明で、matriptase強発現マウスに類似しており、HAI-1欠失に伴うmatriptase制御不能が示唆された。死に至る原因を含めて詳細な解析を行っている。さらに、各臓器における機能を解析するために、コンディショナルノックアウトマウスを作成している。現在、loxP配列をHAI-1遺伝子領域に挿入したES細胞のスクリーニングが終了した。HAI-2とその関連因子の腎癌での発現、HAI-2の下流に遺伝子息を持つHAI-2 related smallproteinの大腸癌での発現についても解析し、発表した。また、in vitro実験として、ノックアウトマウス胎仔の初代培養で得られたHAI-1欠失細胞株に二段階遺伝子導入を行い、テトラサイクリン濃度依存性にHAI-1を発現させることに成功した。今後、表現型を解析していく。