ウイルスを"分子マシナリー"的視点から捉えたゲノム情報収斂型創薬研究

从“分子机械”角度看待病毒的基因组信息融合药物发现研究

• 批准号: 05J52681
• 负责人: 西川 裕輝
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05J52681/
• 关键词: HIV-1; gp41; T-20; 膜融合阻害剤; α-helix; ペプチド; ELISA; HIV; FIV; SARS-CoV

今年度は、前年度に引き続いてHIV膜融合を標的とした阻害剤の創製研究に取り組んだ。具体的には、T-20耐性獲得ウイルスに対し、我々がこれまでに創製した阻害剤の抗HIV活性について精査した。阻害剤としてはペプチド性膜融合阻害剤SC34EKを基盤分子とし、抗HIV活性を測定したところ、T-20耐性株に対しても強力な活性を示すことが明らかとなった。この現象を物理化学的な視点から考察すべく、circular dichroism (CD)測定により熱安定性、結合親和性を評価したところ、SC34EKは耐性獲得ウイルスに対しても強く相互作用するという知見が得られ、SC34EK はT-20に続く第二世代膜融合阻害剤となりうるのではないかと予想される。また、上記のような膜融合阻害剤の活性評価は一般に感染性を有するウイルスと宿主培養細胞を用いるため、高い封じ込めレベルの実験施設が必要であること、実験者への感染リスクが伴うといった問題が生ずる。これら問題点を解消すべく、安全かつ簡便な新規スクリーニング法をELISAを基盤として構築した。その原理は膜融合におけるHIVgp41の構造変化をin vitroで模倣したものであり、具体的には、gp41の構造変化の際に重要となるgp41中のHR1およびHR2と一般に呼ばれる領域を大腸菌により融合タンパクとして別々に作成し、HR1-HR2相互作用をALP反応基質の発色により検出する。阻害剤は両者の相互作用をブロックするため、発色を示さず、その阻害活性を吸光度により定量することが出来る。事実、ウイルス/細胞を用いた方法と同様、このELISAによっても融合阻害ペプチドの効果を測定することが可能であった。このことから、本方法はHIV膜融合阻害剤の一次スクリーニングシステムとして有用であることが示唆された。

This year, に, and the previous year, に, 続, 続, て, research on the creation of HIV membrane fusion を targets, と, た, た, and inhibitors, に, took the んだ group. Specific に は, T - 20 patience ウ イ ル ス に し seaborne, I 々 が こ れ ま で に created し た resistance against tonic の anti-hiv activity に つ い て fine check し た. Resistance against tonic と し て は ペ プ チ ド sex membrane fusion resistance against tonic SC34EK を substrate molecule と し, determination of anti-hiv activity を し た と こ ろ, T - 20 patience に し seaborne て も を and shown strong な activity す こ と が Ming ら か と な っ た. こ の phenomenon を な viewpoint of physical chemistry か ら investigation す べ く, circular dichroism (CD) に よ り thermal stability, combined with affinity を review 価 し た と こ ろ, SC34EK は patience for ウ イ ル ス に し seaborne て も strong く interaction す る と い う knowledge が must ら れ, SC34EK <s:1> T-20に続く second-generation membrane fusion inhibitor とな <s:1> うる <s:1> で な な と と と yu you される. ま た, written の よ う な resistance against tonic の activity evaluation of membrane fusion 価 は general に infectious を has す る ウ イ ル ス と host culture cell を with い る た め, high い じ 込 め レ ベ ル の be 験 facilities necessary で が あ る こ と, be 験 person へ の infection リ ス ク が with う と い っ た problem が raw ず る. こ れ ら problem point を null す べ く, safety か つ simple な new rules ス ク リ ー ニ ン グ method を ELISA を base plate と し て build し た. The principle of そ <s:1> membrane fusion におけるHIVgp41 <s:1> structural transformation をin Vitro imitation で し た も の で あ り, concrete に は, gp41 の structure - the event の に important と な る gp41 の in documents (お よ び HR2 と に commonly called ば れ る field を coliform に よ り fusion タ ン パ ク と し て don't 々 に made し interaction, the documents - HR2 を ALP anti 応 matrix の 発 color に よ り 検 out す る. Resistance against tonic は struck is の interaction を ブ ロ ッ ク す る た め, 発 color を さ ず, そ の resistance against active を absorbance に よ り quantitative す る こ と が る. Things be, ウ イ ル ス / cell を い と た method with others, こ の ELISA に よ っ て も fusion resistance against ペ プ チ ド の sharper determination of fruit を す る こ と が may で あ っ た. こ の こ と か ら membrane fusion, this method は HIV resistance against tonic の a ス ク リ ー ニ ン グ シ ス テ ム と し て useful で あ る こ と が in stopping さ れ た.

项目成果

抗SARS-CoV活性ペプチドの創製研究

抗SARS-CoV活性肽的制备研究

• 发表时间: 2005
• 期刊: Med.Chem.News 15巻
• 作者: Oishi;S.;Ito;S.;Nishikawa;H.;Watanabe;K.;Tanaka;M.;0hno;H.;Izumi;K.;Sakagami;Y.;Kodama;E.;Matsuoka;M.;and Fuiii;N.;西川 裕輝
• 通讯作者: 西川 裕輝

ネコ免疫不全ウイルス(FIV)膜融合阻害剤の創製研究

猫免疫缺陷病毒（FIV）膜融合抑制剂的研制

• 发表时间: 2007
• 作者: 西川裕樹;et al.
• 通讯作者: et al.

Heptad repeat-derived peptides block protease-mediated dnrect entry from the cells surface of severe acute respiratory syndrome coronavirus but not entry via the endosomal pathway

七肽重复衍生肽可阻断蛋白酶介导的严重急性呼吸综合征冠状病毒细胞表面的直接进入，但不能通过内体途径进入

• 发表时间: 2008
• 期刊: Journal of Virology 82
• 作者: Ujike;M.;Nishikawa;H.;Otaka;A.;Yamamoto;N.;Yamamoto;N.;Matsuoka;M.;Kodama;E.;Fujii;N.;and Taguchi;F.
• 通讯作者: F.

Design of a novel HIV-1 fhsion inhibitor that displays a minimal interfhce for binding affinity

一种新型 HIV-1 融合抑制剂的设计，其结合亲和力显示出最小的干扰

• 发表时间: 2008
• 期刊: Journal of Medicinal Chemistry 51
• 作者: Oishi;S.;Ito;S.;Nishikawa;H.;Watanabe;K.;Tanaka;M.;0hno;H.;Izumi;K.;Sakagami;Y.;Kodama;E.;Matsuoka;M.;and Fuiii;N.
• 通讯作者: N.