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ニトロソ化内因性プロテアーゼインヒビターによる歯周病原菌の活性阻害

亚硝化内源性蛋白酶抑制剂抑制牙周病原菌活性

基本信息

批准号：
15791250
负责人：
小倉理恵子
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Fukuoka Dental College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

α2-plasmin inhibitor(α2PI)はヒト血漿中に約69μg/ml(約1μM)存在するセルピンの1つで、分子内に4個の遊離SH基を持つ。生体内では単にプラスミン活性を阻害するだけでなく、プラスミノゲンのフィブリンへの結合を阻害し血液凝固時にフィブリンに架橋結合があるため、フィブリン溶解(線溶)の特異的なインヒビターとして働いている。赤池らの報告によると、このSH基が容易にS-ニトロソ化されることから、α2PIのS-ニトロソ化合物S-NO-α2PIを作製し、これがP.gingivalisのプロテアーゼに対して有効なインヒビターとして機能するか検討した。P.gingivalis ATCC33277株の培養上清より、イオン交換カラムを用いてトリプシン様活性画分(Arg-gingipain : Rgp)を精製した。α2PIをDTTで還元した後イソペンチルナトライトを用いてS-ニトロソ化し、HPLC-フローリアクター法でS-NO-α2PIを定量した。Rgpおよびプラスミンに対するS-NO-α2PIのプロテアーゼ阻害活性は、それぞれの特異的合成基質を用いて評価した。プラスミンの存在下α2PIの血漿中濃度において、α2PIはRgpの活性を約75%、S-NO-α2PIは約80%阻害した。また培養上清においても同様にRgpの活性を阻害した。α2PIをS-ニトロソ化することによって、わずかではあるがRgpに対する阻害能が向上した。阻害係数を測定したところ、Rgpに対するKiはα2PIでは、3.9x10^<-7>M、S-NO-α2PIでは3.8x10^<-7>Mであった。生体内においてα2PIは、Rgpの侵襲から生体を防御する因子としても作用し、さらにプラスミンの活性を抑制することが推測され、線溶・凝固系の制御因子としての働きだけでなく、感染防御因子とLての役割も果たしているのではないかと考えられた。

α2-plasmin inhibitor (α2PI) contains approximately 69 μg/ml (approximately 1 μM) of α2-plasmin inhibitor (α2PI) in plasma, and contains 4 free SH groups in the molecule. The activity of では単にプラスミン in the body hinders するだけでなく, and the プラスミノゲンのフィブリンへのcombination hinders blood coagulation. Solid time にフィブリンに bridging combined with があるため, フィブリン dissolve (line melt) special なインヒビターとして卍いている. Akaike's report, によると, このSH-based easy にS-ニトロソ化されることから, α2PIのS-ニトロソ compound S-NO-α 2PIをproducedし、これがP.gingivalisのプロテアーゼに対してeffectiveなインヒビターとしてfunctionalityするか検した. The culture supernatant of P.gingivalis ATCC33277 strain was purified using Arg-gingipain: Rgp, which was exchanged with カラムを using Arg-gingipain: Rgp. α2PIをDTTで元した后イソペンチルナトライトを用いてS-ニトロS-NO-α2PI was quantitatively analyzed using the HPLC-Florida method. Rgp およびプラスミンに対するS-NO-α2PI のプロテアーゼ blocks activity は, それぞれのspecific synthetic matrix をいて evaluation 価した. In the presence of プラスミンの, the plasma concentration of α2PI is reduced, the activity of α2PIRgp is approximately 75%, and the activity of S-NO-α2PI is approximately 80%. The culture supernatant is used to prevent the activity of Rgp. α2PIをS-ニトロソ化することによって、わずかではあるがRgpに対する hindering energy がUPした. The resistance coefficient is determined by したところ, Rgpに対するKiはα2PIでは, 3.9x10^<-7>M, S-NO-α2PIでは3.8x10^<-7>Mであった.においてα2PIは in the body, Rgp のinvasive からbiotic をdefense factor としてもaction し, さらにプラスミンのactivity をinhibition することが push Measuring され, linear dissolution and coagulation control factor としての働きだけでなく, infection The defense factor is the result of the attack.