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ヌクレオチド除去修復におけるDDBの機能とクロマチン構造変換機構の解析

核苷酸切除修复中DDB功能及染色质结构转换机制分析

基本信息

批准号：
16710031
负责人：
若杉光生
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

ヌクレオチド除去修復反応におけるDDBの機能とクロマチン構造変換機構を明らかにするために、以下の点について解析を行った。まず、昨年度解析したDDBと相互作用するヒストンアセチルトランスフェラーゼに加え、クロマチンの構造変換に関わるATP依存性クロマチンリモデリング因子の修復反応への関与について検討した。出芽酵母のATP依存性クロマチンリモデリング因子の一つであるIno80複合体は、その欠損体が紫外線を含む種々のDNA傷害剤に対して高感受性を示すことが知られている。最近になり、ATPase活性を担うIno80サブユニットのホモログ(hIno80)がヒトにおいても存在することがわかったので、cDNAを入手して外来発現系を構築した。ヒト細胞内でhIno80を発現後、局所的紫外線照射法により核の一部にDNA損傷を誘起し、蛍光免疫染色によりその局在性を解析した。しかし、ヌクレオチド除去修復の基本修復因子やDDBとは異なり、DNA損傷部位への集積は観察されなかった。また、SWI/SNF複合体のサブユニットについても検討したが、DNA損傷部位に集積することはなかった。また、DDBの機能を明らかにするために、DDBのサブユニットのうち自然に変異体が存在しないDDB1のノックアウト細胞の作成を行った。ニワトリDT40細胞を用いた通常のターゲッティングでは、ホモ接合体細胞を得ることはできなかったが、コンディショナルミュータントの作成に成功した。そして、細胞内のDDB1タンパク質を消失させると、細胞周期のS期の進行に異常を生じ、増殖が遅延して、最終的に死に至ることがわかった。さらに、siRNAを用いてDDB1を欠損させたヒト細胞も同様な表現型を示すことを見いだし、DDB1が細胞の生存に欠くことのできない重要な機能をもっことを明らかにした。

The function of the DDB is to remove the damage caused by the damage. The relationship between ATP dependence and structural transformation of DDB interaction factors is discussed. The ATP dependence of budding yeasts on DNA damage factors in the Ino-80 complex, including UV damage, and high susceptibility to DNA damage. Recently, the activity of ATPase was affected by Ino 80, and the gene expression system was constructed by cDNA. After hIno80 was detected in the cells, the Institute's ultraviolet irradiation method induced DNA damage in part of the nucleus, and fluorescent immunostaining analyzed the localization of the protein. DNA damage is detected by DNA damage accumulation. The SWI/SNF complex is a complex of DNA damage. The function of DDB is clear, and the function of DDB is natural. Dt40 cells were successfully constructed with the help of the normal cells. DDB1 in the cell disappears, abnormal growth occurs during the S phase of the cell cycle, and finally death occurs. The expression of DDB1 mRNA is important for cell survival.