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ヌクレオチド除去修復におけるクロマチン制御とDDBの機能

染色质控制和 DDB 在核苷酸切除修复中的功能

基本信息

批准号：
18710044
负责人：
若杉光生
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

ヌクレオチド除去修復におけるクロマチン構造変換機構とDDBの機能を明らかにするために、主に以下の点について解析を行った。まず、DDBとクロマチンリモデリングに関わるタンパク質との関連性を調べるために、免疫沈降法によりDDBと共沈降するタンパク質をウェスタンブロッティングにより解析した。その結果、今までDDBと相互作用することが知られていなかったタンパク質が含まれることがわかったので、細胞内で共発現することによりDDBとの相互作用を確認した。また興味深いことには、細胞に紫外線を照射した時に、そのタンパク質がDNA損傷部位に集積することがわかり、紫外線によるDNA損傷応答において何らかの役割を担っていることが示唆された。現在、ヌクレオチド除去修復反応に及ぼす影響についてさらに詳細な解析を進めている。一方、ニワトリDT40細胞を用いて作成したDDB1のコンディショナルノックアウト細胞で、紫外線以外のDNA傷害剤に対する応答についても解析を行った。その結果、DNA複製を介して二本鎖切断を生じるcamptothecin(CPT)を処理すると、野生型DT40細胞はG_2/M期に停止するのに対し、DDB1を欠損させた場合にはG_2/M期まで進まず、S期の初期で停止することがわかった。さらに、ミトコンドリアの還元酵素活性を指標にCPTに対する感受性について検討したところ、DDB1を欠損させると感受性が有意に増加することがわかった。したがって、DDB1がCPTによるDNA損傷応答において何らかの役割を担っていることが推察され、このDDB1の新しい機能に注目して解析を行っている。

In order to remove the repair system, the DDB machine is able to show that the system is in operation, and the following points are required to analyze the data. In this study, we used immunoprecipitation method, immunoprecipitation method, DDB co-precipitation method, immunoprecipitation method, and immunoprecipitation method. The results show that the interaction between DDB and DDB is confirmed by the fact that there is no significant difference between the results and the results. There is a deep smell in the air, the ultraviolet ray is very sensitive, the ultraviolet ray is very sensitive to the exposure of the ultraviolet ray, the ultraviolet ray is very sensitive, the ultraviolet ray, the Now, we need to get rid of the correction and impact on the analysis and analysis. On the one hand, the DT40 cell is used to make the DDB1 cell, the DNA cell outside the UV line, the cell, the cell, the cell. The results of this study were as follows: the results of DNA replication, the cut-off of camptothecin (CPT) in ordinary universities, the termination of G _ 2