权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

骨格筋細胞のカルシウム動態解析による悪性高熱症発症機序の解明と素因診断

通过分析骨骼肌细胞中的钙动态阐明恶性高热的发病机制和诊断倾向

基本信息

批准号：
17390428
负责人：
河本昌志
金额：
$ 10.37万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

平成20年4月から21年3月までに,悪性高熱症や関連疾患患者およびその血縁者9名でCICR(Ca-induced Ca release)速度の測定を行った.1名で冷蔵宅配便を利用して摘出骨格筋を輸送した.内訳は,悪性高熱症劇症型2名,悪性高熱症の家族歴5名,筋疾患2名であった.7名でCICR速度の亢進があり悪性高熱症の素因があると診断したが,2名ではCICR速度の亢進はなかった.同意が得られた8名の摘出骨格筋から衛星細胞を培養後,-70℃で凍結保存したのち培養したところ,その成功率は100%であった.凍結細胞を解凍後,myotubesに分化した状態でmyotubesのカルシウム動態を検討した.骨格筋小胞体のカルシウム放出チャンネルの刺激薬であるカフェイン,ハロタンおよび4CmCを使用して,細胞内のカルシウムイオン濃度の上昇を,CICR亢進がある亢進群とない非亢進群で比較した.この対象症例は亢進群23,非亢進群23であった.カフェインのEC50は亢進群2.69±0.77mM,非亢進群5.25±0.77mM,ハロタンのEC50は亢進群1.71±0.35mM,非亢進群は3.56±0.77,4CmCのEC50は充進群143.9±36.5μM,非亢進群は298.4±61.8μMで,すべて両群間に有意差が認められた.なおプロポフォールは,臨床使用濃度ではmyotubesのカルシウムイオン濃度の上昇は認められなかった.カルシウム拮抗薬であるニフェジピンは150nMでmyotubesの細胞内のカルシウム濃度を上昇させた.HEK細胞に悪性高熱症の原因と考えられる変異RYR1遺伝子を導入したところ,この細胞ではカフェインや4CmCではより低濃度の刺激で細胞内のカルシウム濃度の上昇が確認され,この変異が悪性高熱症の原因であることが示唆された.

From April 20th to March 21st, 2007, 9 patients with hyperthermia and related diseases were diagnosed as CICR(Ca-induced Ca release). 2 cases were diagnosed as severe type of internal hyperthermia, 5 cases as family type of internal hyperthermia, 2 cases as muscle disease, 7 cases as hyperactivity of CICR speed, 2 cases as hyperactivity of CICR speed. After culture, frozen at-70 ℃, the success rate was 100%. After thawing frozen cells,myotubes differentiate into different states, and their dynamics are investigated. The cell structure of bone tendon cells releases a stimulating agent for cell growth. When 4CmC is used, the concentration of intracellular cell structure increases. CICR is hyperactive. The hyperactivity group 23 and the non-hyperactivity group 23 are the symptoms. The EC50 of the hyperactive group was 2.69± 0.77 mM, the non-hyperactive group was 5.25± 0.77 mM, the hyperactive group was 1.71± 0.35 mM, the non-hyperactive group was 3.56± 0.77, the EC50 of the 4CmC was 143.9±36.5μM, the non-hyperactive group was 298.4±61.8μM, and the difference between the hyperactive group and the non-hyperactive group was significant. The concentration of myotubes in clinical use is increasing. The increase of intracellular concentration of RYR1 gene in HEK cells was confirmed by the introduction of RYR1 gene into HEK cells. The increase of intracellular concentration of RYR1 gene in HEK cells was confirmed by the introduction of RYR1 gene into HEK cells.