Screening of host facters affected by CagA, a virulence factor of Helicobacter pylori

幽门螺杆菌毒力因子CagA影响宿主因子的筛选

• 批准号: 17590648
• 负责人: AKADA Junko
• 金额: $ 2.36万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17590648/
• 关键词: CagA; Helicobacter pylori; Yeast; Endocytosis; Gastric disease; GEEC pathway; 胃疾患; 持続感染; 酵母遺伝学

Helicobacter pylon is an important pathogen that is associated with various diseases including chronic gastritis. peptic ulcer and gastric cancer. H pylori translocates CagA protein into gastric epithelial cells by the type IV secretion system and induces morphogenetic response of the host cells. To understand CagA function in eukaryotic cells, we expressed cagA gene in wild type diploid Saccharomyces cerevisiae or a set of homozygous deletion mutants for 4792 nonessential genes. Overexpression of CagA caused growth inhibition in wild type yeast and more severe growth inhibition in 18 mutant strains, 7 strains of which fell in the functional category of vacuole biogenesis and endocytosis pathway that is highly conserved in all eukaryotes. Indeed, all of 7 genes corresponding to the deletion strains have mammalian homologues. We expressed CagA that is fused to the yeast-optimized GFP (yEGFP) to find that CagA was localized at yeast cell periphery similarly in mammalian cells. We observed the dynamics of endocytosis in yeast using a membrane lipid probe FM4-64 in the presence or absence of yEGFP-CagA. Expression of yEGFP-CagA but not yEGFP alone caused marked delay in the transition of endosomes from the plasma membrane to vacuoles. We next observed the impact of CagA expression on the endocytosis dynamics in mammalian cells using transferrin, a probe for the clathrin-mediated endocytosis and cholera toxin B (CT-B), a probe for the lipid-raft mediated endocytosis. CagA specifically inhibited CT-B endocytosis without interfering with the endocytosis of transferrin in the gastric epithelial AGS cells. From these results. We propose that H pylon CagA inhibits the lipid raft-mediated endocytosis in mammalian cells, which may be important in pathogenesis of various diseases associated with H pylon infection.

幽门螺杆菌是一种与包括慢性胃炎在内的多种疾病有关的重要病原体。消化性溃疡和胃癌。幽门螺杆菌通过IV型分泌系统将CagA蛋白转运到胃上皮细胞中，诱导宿主细胞的形态发生反应。为了了解CagA在真核细胞中的功能，我们在野生型二倍体酿酒酵母或4792个非必需基因的纯合缺失突变体中表达了CagA基因。CagA过表达导致野生型酵母菌的生长受到抑制，18株突变菌株的生长受到更严重的抑制，其中7株属于液泡生物发生和内吞途径的功能范畴，在所有真核生物中都高度保守。事实上，缺失菌株对应的7个基因都有哺乳动物同源物。我们表达了与酵母优化的GFP （yEGFP）融合的CagA，发现CagA在哺乳动物细胞中类似地定位于酵母细胞周围。我们使用膜脂探针FM4-64观察了酵母在存在或不存在yEGFP-CagA时的内吞动力学。表达yEGFP- caga而不是单独表达yEGFP会导致内体从质膜向液泡过渡的明显延迟。接下来，我们使用转铁蛋白（一种网格蛋白介导的内吞作用探针）和霍乱毒素B（一种脂质筏介导的内吞作用探针）观察了CagA表达对哺乳动物细胞内吞动力学的影响。CagA特异性抑制胃上皮AGS细胞中CT-B的内吞作用，而不干扰转铁蛋白的内吞作用。从这些结果中。我们认为H塔CagA抑制哺乳动物细胞脂质筏介导的内吞作用，这可能在与H塔感染相关的各种疾病的发病机制中起重要作用。

项目成果

A genome-wide screening in yeast for genes affecting Helieobacter pylori virulence factor CagA

酵母全基因组筛选影响幽门螺杆菌毒力因子 CagA 的基因

• 发表时间: 2005
• 作者: Nakamura;K;Junko K. Akada;Junko K. Akada;赤田 純子;J. Akada;Junko K. Akada;Junko K. Akada;赤田 純子;Junko K. Akada;Junko K. Akada;Junko K. Akada;Junko K. Akada
• 通讯作者: Junko K. Akada

培養細胞感染系においてCagAはVacAの細胞空胞化を抑制する

CagA 抑制培养细胞感染系统中 VacA 的细胞空泡化

• 发表时间: 2008
• 作者: Nakamura;K;Junko K. Akada;Junko K. Akada;赤田 純子
• 通讯作者: 赤田 純子

Helicobacter pylori CagAは酵母細胞のエンドサイトーシスを阻害する

幽门螺杆菌 CagA 抑制酵母细胞的内吞作用

• 发表时间: 2005
• 作者: Nakamura;K;Junko K. Akada;Junko K. Akada;赤田 純子;J. Akada;Junko K. Akada;Junko K. Akada;赤田 純子;Junko K. Akada;Junko K. Akada;Junko K. Akada;Junko K. Akada;赤田 純子
• 通讯作者: 赤田 純子

結合因子からみるCagAの細胞内機能とさらなる謎

从结合因子观察 CagA 的细胞内功能和更多谜团

• 发表时间: 2007
• 期刊: 日本ヘリコバクター学会誌 9(2)
• 作者: Amano Y;et al.;赤田 純子
• 通讯作者: 赤田 純子

A genome-wide screening in yeast for genes affecting Helicobacter pylorivirulence factor CagA

酵母中影响幽门螺杆菌毒力因子 CagA 的基因的全基因组筛选

• 发表时间: 2005
• 作者: Nakamura;K;Junko K. Akada;Junko K. Akada;赤田 純子;J. Akada;Junko K. Akada;Junko K. Akada;赤田 純子;Junko K. Akada;Junko K. Akada;Junko K. Akada
• 通讯作者: Junko K. Akada