肝臓初期発生と再生過程の比較解析による未分化細胞からの肝細胞分化決定機構の探索

通过早期肝脏发育和再生过程的比较分析，探讨未分化细胞分化为肝细胞的机制

• 批准号: 17770188
• 负责人: 小池 亨
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Shizuoka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17770188/
• 关键词: 肝臓; 発生; 再生; 内胚葉; 幹佐揖保; 培養; 肝細胞; 分化; 再生医学; 細胞・組織; 発生・分化; 幹細胞; ニコチンアミド

本研究は,肝臓発生過程での未分化内胚葉からの肝細胞の分化機構と,肝再生過程での各種幹細胞からの肝細胞の分化機構における共通性や相違性を比較解析し,そこに関わる分子的実体を明らかにする事を最終目標としてきた。平成18年度の実績の概要を以下に記す。1)マウス妊娠9.5日胚の肝臓原基内胚葉単独培養系を応用して,肝細胞分化に対する分泌性因子の作用を解析した。肝臓原基内胚葉は単独培養ではほとんど増殖活性を示さず,細胞の分化も進まなかったが,マウス胎児肝臓片との「トランスフィルター培養実験」や「コンディションド寒天培地を用いた培養実験」を行なった結果,その分化と増殖活性の上昇が観察された。またMEKインヒビター存在下での肝臓原基の器官培養を行なった結果,肝細胞の分化は起こるが増殖活性が低下していた。従って,肝細胞分化・増殖に関わる因子は分泌性因子であり,その増殖誘導はMAPキナーゼ系を介して制御されているが,その分化にはMAPキナーゼ系を介さないことが明らかになった。2)肝発生・再生過程の内胚葉と幹細胞で共通して発現する因子を探るために,各種転写因子や接着分子,シグナル伝達分子について組織化学的な解析やウェスタンブロッティング,RT-PCRにて解析を行なった。その結果,HNF3βなどのいくつかの転写因子が肝臓原基内胚葉と再生過程の幹細胞で共通して強く発現することを見つけた。3)肝臓の発生・再生過程での幹細胞での遺伝子発現を解析するための新規実験系の確立に向けて,幹細胞の核形態や核内発現分子に注目しながら,それらの核を単離精製する技術の確立を目指した。これらについては,核単離の条件検討を行なっている段階で終了となった。

The aim of this study is to analyze the commonality and incompatibility of differentiation mechanisms of undifferentiated endoblast and hepatocytes during liver development and liver regeneration, and to clarify the molecular mechanisms involved. A summary of the results for the year ended 31 December 2018 is set out below. 1) The role of secretory factors in hepatocyte differentiation was analyzed by using the isolated culture system of liver primordium from 9.5-day-old embryos. The proliferation activity of embryo leaves isolated from liver primordium was shown, and the differentiation and proliferation activity of cells were observed. In the presence of MEK, the proliferation activity of liver cells was decreased. However, there are both factors related to hepatocyte differentiation and proliferation and secretory factors, and the induction of proliferation is controlled by the MAP ー system, and the differentiation is controlled by the MAP ー system. 2)In the process of liver development and regeneration, the common factors of endoblast and stem cell development were explored, and various writing factors and binding molecules were analyzed by histochemistry and RT-PCR. As a result, HNF3 β was found to be a common factor in the development of stem cells in the embryo and regeneration process of liver primordia. 3)The development and regeneration of liver stem cells in the process of gene expression analysis, and the establishment of new regulatory system direction, stem cell nuclear morphology and nuclear gene expression molecules in the attention, and the establishment of nuclear purification technology. This is the end of the process.