昆虫病原性微胞子虫の宿主細胞適合性〜昆虫およびヒト培養細胞での比較検討

昆虫病原小孢子虫的宿主细胞相容性：昆虫和人类培养细胞的比较研究

• 批准号: 17780041
• 负责人: 青木 智佐
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17780041/
• 关键词: Nosema bombycis; 昆虫培養細胞系; HeLa 53 細胞系; 宿主細胞適合性; ストレスタンパク質; 胞子表面抗原; カイコ病原性微胞子虫; HeLa S3細胞系; 微胞子虫増殖阻害; 超微形態

カイコ微粒子病病原Nosenma bombycis NIS OO1株胞子を,広範囲(25℃〜37℃)の温度条件下で培養可能な鱗翅目ヤガ科昆虫由来Spacibptera frugipeda NIAS-Sf-D1細胞系およびヒト子宮頸部癌由来HeLa S-3細胞系へ接種し,27℃または37℃で培養した。胞子接種7日後の感染培養からタンパク質を抽出し,各組み合わせと各培養温度下でのタンパク質発現の変化を,1次元及び2次元電気泳動により解析した。Sf-D1細胞系は微胞子虫非感染下でも培養温度によって異なるタンパク質発現パターンを示し,37℃では20〜30KDa程度のタンパク質が減少する一方で,約63KDaタンパク質の発現の増強が認められた。微胞子虫感染特異的に発現するタンパク質について,27℃培養区では,HeLa S-3細胞系では微胞子虫が感染増殖するにもかかわらずタンパク質動態の変化は全く認められなかったが,Sf-D1細胞系においては約27 Kdaのタンパク質が新たに誘導された。また37℃培養区では,Heda S-3細胞系においてのみ約40 Ma及び70 Kdaのタンパク質の発現が認められ,本微胞子虫の感染は成立しないものの,胞子発芽からスポロプラズムの宿主細胞侵入が,これらストレスタンパク質誘導の一因となっている可能性が示唆された。また,本微胞子虫胞子表面抗原に特異的なIgG抗体を供試し,免疫染色により胞子表面抗原の動態を光学顕微鏡および電子顕微鏡を用いて解析した。胞子表面抗原は生活環を通して普遍的に存在するものではなく,その発現はenvironmental sporeが形成される時期と重なっていた。一方, primary sporeには抗原抗体反応は認められず,これら二型胞子がその役割だけでなく抗原的にも全く異なることが明らかとなった。

Nosenma bombycis NIS OOO 1 strain was cultured at 25℃ ~ 37℃ and its spores were inoculated with the HeLa S-3 cell line. 7 days after spore inoculation, the culture medium was extracted, and the changes of the culture medium were analyzed under different culture temperatures, 1-D and 2-D electrophoresis. Sf-D1 cell line showed a decrease in cell quality from 20 to 30KDa at 37 ℃, and an increase in cell quality from 63KDa at 37 ℃. Microspora infection specific development, 27 ℃ culture zone,HeLa S-3 cell line microspora infection proliferation, development,Sf-D1 cell line Sf-D1 cell line about 27 Kda,Sf-D1 cell line,Sf-D1 cell line Sf-D1 In the 37℃ culture zone,Heda S-3 cell line was cultured at about 40 Ma and 70 Kda, and the microspore infection was established. The spore germination and invasion of host cells showed the possibility of one cause of induction of microspore. In addition, IgG antibodies specific to the spore surface antigen of this microspore were tested, and the dynamics of the spore surface antigen were analyzed by immunostaining and optical microscopy. Spore surface antigens are common in life cycles, but they appear in environmental spores. A party, primary spore anti-antigen antibody anti-recognition, two types of spores, two types of anti-antigen anti-antigen anti-discrimination, two types of anti-antigen anti-antigen anti-antibody anti-discrimination.