新規β-ヒドロキシアスパラギン酸変換酵素の探索

寻找新型β-羟基天冬氨酸转化酶

• 批准号: 17780054
• 负责人: 和田 大
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17780054/
• 关键词: ヒドロキシアスパラギン酸; PLP酵素; 新奇酵素; スクリーニング; 酵素

平成18年度はD-threo-3-ヒドロキシアスパラギン酸デヒドラターゼの探索と精製を行った。3-ヒドロキシアスパラギン酸(HO-Asp)はアスパラギン酸の構造アナログであり、4つの光学異性体を持つ。すでに4つの異性体のうちL-threo-HO-Aspに作用するデヒドラターゼがPseudomonas sp.T62から発見されている^<(1)>。本研究では、これまでに報告がないD-threo体を特異的に変換する酵素を探索し、その諸性質の解明をすることを目的とした。土壌よりD-threo-HO-Asp資化性菌を単離した。その後、TLCでD-threo-HO-Aspを減少させる速度が速い菌株を選抜し、無細胞抽出液のデヒドラターゼ活性を測定した。そのうち、最も高い分解活性を示したDelftia sp.HT23株からD-threo-HO-Aspデヒドラターゼを電気泳動的に均一に精製した。本酵素はMg2+やMn2+の金属要求性およびPLP依存性を示した。分子量はSDS-PAGE上で約41,000、ゲルろ過HPLC上で約36,000と見積もられモノマーと推定された。本酵素はD-threo体およびL-erythro体に対して高活性を示したが、L-threo体に対して微弱な活性を示した。このことから、本酵素はDL-threo-3-ヒドロキシアスパラギン酸の光学分割に利用できる可能性がある。本酵素はD-threo-HO-Aspに対して活性を示すデヒドラターゼの初めての例である。本酵素のN末端アミノ酸配列を解析した結果、本酵素のN末端はグラム陰性細菌のPutativeなアラニンラセマーゼなどと高い相同性を示した。(1)Wada M.et al., FEMS Microbiol.Lett., 179, 147-151(1999)

In 2018, D-threo-3 was selected as the research and development team of the company. 3-(HO-Asp)-(HO-Asp) 4. The role of L-threo-HO-Asp in Pseudomonas sp.T62 is discussed in detail below. This paper reports on the study of D-treo-specific enzymes and their properties. D-threo-HO-Asp is the most effective method for producing bacteria. After TLC, D-threo-HO-Asp was reduced, the rate of strain selection was increased, and the activity of cell-free extract was determined. Delftia sp.HT23 strain D-threo-HO-Asp is the most active and homogeneous strain in electrophoresis. The enzyme showed Mg2 + and Mn2 + metal requirements and PLP dependence. The molecular weight was about 41,000 on SDS-PAGE and 36,000 on HPLC. The enzyme showed high activity for D-threo and L-erythrosome, and low activity for L-threo. This enzyme has the potential to be used for optical separation of DL-threo-3-deoxy-thymidine. The enzyme is D-threo-HO-Asp. Analysis of the N-terminal amino acid sequence of this enzyme, Putative amino acid sequence of N-terminal amino acid sequence of this enzyme and high identity of this enzyme were shown. (1)Wada M.et al., FEMS Microbiol.Lett., 179, 147-151(1999)