H6型鳥インフルエンザウイルスの宿主域決定に与るウイルス蛋白の機能解析

H6禽流感病毒宿主范围确定相关病毒蛋白的功能分析

• 批准号: 17780224
• 负责人: 尾崎 弘一
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17780224/
• 关键词: ウイルス学; インフルエンザウイルス; 宿主特異性; 宿主因子

本研究において、水禽由来および家禽由来のウイルスが極の壁を超えるのに必要な因子を解明することを目的として解析を行った。ニワトリ気管で増殖するウイルスであるA/teal/HongKong/W312/97(H6N1)(teal/97)、ウズラでのみ増殖するウイルスであるA/duck/Shantou/5540/01(H6N2)(duck/Ol)からクローニングした発現プラスミドを作製し、teal/97ウイルスをベースに遺伝子分節を1本ずつduck/01ウイルスのものと入れ替えた遺伝子再集合体を作出した。これらの遺伝子再集合体を培養細胞に接種してウイルス増殖を検証し、HA、 PB2またはM遺伝子にその原因があることを突き止めた。上記の遺伝子再集合体をウズラまたはニワトリ由来の培養細胞に接種した結果、ウズラ由来の細胞では全ての遺伝子再集合体は同様に増殖した。一方、ニワトリ由来細胞ではHAおよびPB2遺伝子がduck/01ウイルス由来の遺伝子再集合体の増殖が著しく低下することが明らかとなった。次に、先述の試験をウズラとニワトリを用いた感染実験で検証した。ウズラでは全ての遺伝子再集合体の増殖が確認された。一方、HAおよびPB2遺伝子がduck/0lウイルスに由来する遺伝子際集合体はin vitro試験と同様に、ニワトリでは増殖できないことが判明した。この成績は水禽由来のウイルスが宿主の壁を越える際に少なくとも2つのタンパク質の変化が必要であることを示唆している。teal/97のHA分子は鳥型およびヒト型両方のレセプターを認識するのに対し、duck/01のHA分子は鳥型のレセプターのみを認識していたことがHA分子についての原因と考えられる。また、PB2についてはその原因となる領域が明確に示されていないため、詳細に比較して機能部位を明らかにすることが必要である。今後の展望として、PB2タンパクと相互作用する宿主因子を明らかにし、その因子と宿主特異性の関連を実証する予定である。

在这项研究中，进行了分析，目的是阐明从水和家禽穿过极壁所需的因素。 An expression plasmid was cloned from A/teal/HongKong/W312/97 (H6N1) (teal/97), a virus that grows in the chicken trachea, and A/duck/Shantou/5540/01 (H6N2) (duck/Ol), a virus that only grows in quail, and a gene reassembly based on the tele/97 virus, where gene segments用鸭子/01病毒的那些被一一替换。将这些基因重新组合接种到培养的细胞中以验证病毒生长，并确定原因是HA，PB2或M基因。由于将上述基因从鹌鹑或鸡肉中重新组装到培养的细胞中，因此，所有基因在鹌鹑衍生细胞中的所有基因组装都被类似地增殖。另一方面，已经发现在鸡衍生的细胞中，HA和PB2基因显着减少了源自鸭/01病毒的基因重新组合的增殖。接下来，在使用鹌鹑和鸡的感染实验中验证了上述测试。在鹌鹑中证实了所有基因重新组合的扩散。另一方面，发现像体外研究一样，HA和PB2基因源自鸭/0L病毒的基因互化组件不能在鸡中增殖。该结果表明，当来自水鸟的病毒交叉宿主屏障时，至少需要两次蛋白质改变。 telel/97的HA分子识别鸟类和人类受体，而鸭子/01的HA分子仅识别禽受体。此外，由于没有明确说明PB2的原因，因此有必要通过详细比较功能站点来阐明功能站点。作为未来的前景，我们将阐明与PB2蛋白相互作用的宿主因素，并证明这些因素与宿主特异性之间的关联。

项目成果

Highly pathogenic H5N1 influenza virus causes coagulopathy in chickens

• DOI: 10.1111/j.1348-0421.2006.tb03764.x
• 发表时间: 2006-01-01
• 期刊: MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
• 影响因子: 2.6
• 作者: Muramoto, Y;Ozaki, H;Kida, H
• 通讯作者: Kida, H

Studies of H5N1 influenza virus infection of pigs by using viruses isolated in Vietnam and Thailand in 2004

• DOI: 10.1128/jvi.79.16.10821-10825.2005
• 发表时间: 2005-08-01
• 期刊: JOURNAL OF VIROLOGY
• 影响因子: 5.4
• 作者: Choi, YK;Nguyen, TD;Webster, RG
• 通讯作者: Webster, RG

Detection of Influenza virus hemmagglutinin with randomly immobilized anti-hemmagglutinin autibody on a carbon nanotube sensor

碳纳米管传感器上随机固定抗血凝素抗体检测流感病毒血凝素

• 发表时间: 2007
• 期刊: Journal of Nanoscience and Nanotechnology 7
• 作者: Sato T;Kurokawa M.;Nakashima Y;Ida T;Fukue Y;Takahashi T;Ikawa M;Okabe M;Kangawa K;Kojima M;Takeda S
• 通讯作者: Takeda S

Extensive accumulation of influenza virus NS1 protein in the nuclei causes effective viral growth in Vero cells

流感病毒 NS1 蛋白在细胞核中大量积累，导致 Vero 细胞中病毒有效生长

• 发表时间: 2007
• 期刊: Microbiology and Immunology (in press)
• 作者: Sato T;Kurokawa M.;Nakashima Y;Ida T;Fukue Y;Takahashi T;Ikawa M;Okabe M;Kangawa K;Kojima M;Takeda S;Ozaki H
• 通讯作者: Ozaki H

Development of ELISA to detect antibodies specific to Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis with truncated 34 kDa proteins

开发 ELISA 检测鸟分枝杆菌亚种特异性抗体。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Japanese Journal of Veterinary Research 54
• 作者: Sato T;Kurokawa M.;Nakashima Y;Ida T;Fukue Y;Takahashi T;Ikawa M;Okabe M;Kangawa K;Kojima M;Takeda S;Ozaki H;Malamo M
• 通讯作者: Malamo M