Chkチロシンキナーゼによるリン酸化と細胞周期制御機構との関連についての研究

Chk酪氨酸激酶磷酸化与细胞周期调控机制关系的研究

• 批准号: 17790049
• 负责人: 中山 祐治
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790049/
• 关键词: Chkチロシンキナーゼ; Src型チロシンキナーゼ; Cskチロシンキナーゼ; 細胞核; 核マトリックス; チロシンリン酸化

ChkはCskチロシンキナーゼとともにCskファミリーを構成しており,機能および構造的にこれらは類似している。しかしながらCskが細胞核内には分布しないのに対し,Chkは核にも分布する。本年は,Chkの核局在に関与するドメインについて検討した。また,核局在型変異体を用い,細胞増殖に与える影響について解析した。1.Chkチロシンキナーゼの核局在に関与するドメインの検索:ChkはCskには存在しないN末端ドメインを持つ。このN末端ドメインを持つ野生型とN末端ドメインを欠失した変異体を用い,核への局在の違いについて検討した。培養細胞への過剰発現では局在に差が認められなかったので,核への結合性を顕微鏡下で調べることが可能な実験系を構築した。この方法を用い検討した結果,N末端ドメインをもつ野生型Chkが,N末端ドメイン欠失変異体よりも強く核へ結合するのを観察した。これはN末端ドメインが核に結合することを示唆しており,N末端ドメインのみで核への結合性を示す結果も得られた。2.核結合配列の探索:N末端ドメインをさらに前半後半に分け,核への結合性を検討した結果,後半部分に結合配列が含まれることを見出した。3.核マトリックスへの結合:細胞核を界面活性剤,DNaseI,硫安,2M NaClで順次処理して核マトリックスを調製した。N末端ドメインは核マトリックスに結合した。4.核マトリックスのリン酸化:遺伝子導入によりChkを発現させた細胞から核マトリックスを調製し,チロシンリン酸化を蛍光顕微鏡により調べた結果,Chkの発現により核マトリックスのリン酸化の亢進が観察された。5.Chkチロシンキナーゼの核局在と細胞増殖に与える影響:核局在型Chk変異体を発現させると細胞増殖を抑制した。核の形態変化と細胞周期S期の遅延が観察された。

Chk は Csk チ ロ シ ン キ ナ ー ゼ と と も に Csk フ ァ ミ リ ー を constitute し て お り, functional お よ び constructed に こ れ ら は similar し て い る. The に ながらCskが is distributed in the nucleus に が and <s:1> な な に に に に against に, and the に に に of the Chk nucleus is distributed in する. This year, the Chk <s:1> nuclear authority has been in contact with に, するドメ, に, に, て検 and て検 to discuss た. Youdaoplaceholder0, nuclear location-type variants を are analyzed by また, cell proliferation に and える effects に た て て て て. 1. Chk チ ロ シ ン キ ナ ー ゼ の nuclear agency in に masato and す る ド メ イ ン の 検 suo: Chk は Csk に は exist し な い N terminal ド メ イ ン を つ. こ の N terminal ド メ イ ン を hold つ wild-type と N terminal ド メ イ ン を owe lost し た - を use い, nuclear へ の bureau in の violations い に つ い て beg し 検 た. Culture cell へ の before turning 発 now で は bureau in に が recognize め ら れ な か っ た の で, nuclear へ の associativity を 顕 micro microscopically で adjustable べ る こ と が may な be 験 department を build し た. Beg し こ の way を with い 検 た as a result, the N terminal ド メ イ ン を も つ wild-type Chk が, N terminal ド メ イ ン owe lost - variant よ り も strong く nuclear へ combining す る の を 観 examine し た. こ れ は N terminal ド メ イ ン が nuclear に combining す る こ と を in stopping し て お り, N terminal ド メ イ ン の み で nuclear へ の associativity を shown the result of す も ら れ た. Nuclear combined with column 2. の exploration: N terminal ド メ イ ン を さ ら に half に け, after the first half of the nuclear へ の associativity を beg し 検 た as a result, the second half of に combined with column が containing ま れ る こ と を shows し た. 3. The nuclear マ ト リ ッ ク ス へ の combination: the nucleus を interfacial activity, DNaseI, sulfur, 2 m NaCl で progressive 処 Richard し て nuclear マ ト リ ッ ク ス を modulation し た. The n-terminus ドメ ドメ <s:1> トリッ トリッ nucleus トリッ binds トリッ スに スに to た た. 4. Nuclear マ ト リ ッ ク ス の リ ン acidification: heritage 伝 son import に よ り Chk を 発 now さ せ た cells か ら nuclear マ ト リ ッ ク ス を modulation し, チ ロ シ ン リ ン acidification を 蛍 light 顕 micromirror に よ り adjustable べ た results, Chk の 発 now に よ り nuclear マ ト リ ッ ク ス の リ ン acidification の hyperthyroidism が 観 examine さ れ た. 5. Chk チ ロ シ ン キ ナ ー ゼ の に in と cell nuclear bureau raised colonization and え る impact: type nuclear agency in Chk - variant を 発 now さ せ る と を inhibit cell raised colonization し た. Nuclear <s:1> morphological changes と cell cycle S phase <s:1> 遅 extension が観 examination された.

项目成果

Multi-lobulation of the nucleus in prolonged S phase by nuclear expression of Chk tyrosine kinase

• DOI: 10.1016/j.yexcr.2004.11.027
• 发表时间: 2005-04-01
• 期刊: EXPERIMENTAL CELL RESEARCH
• 影响因子: 3.7
• 作者: Nakayama, Y;Yamaguchi, N
• 通讯作者: Yamaguchi, N