Src型チロシンキナーゼの大腸癌増殖における役割

Src型酪氨酸激酶在结直肠癌生长中的作用

基本信息

批准号：
09770365
负责人：
中村和彦
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770365/
关键词：
大腸癌チロシンキナーゼアンチセンスオリゴヌクレオチド

项目摘要

これまでの我々の実験で大腸癌細胞株SW620にsrcmRNAに対するアンチセンスオリゴヌクレオチド(ホスホロチオエ-ト化)を加えると細胞の増殖が抑制されるがlckmRNA、yesmRNAに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドは細胞増殖抑制効果を示さないことが示されていた。しかし、srcmRNAに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドの細胞増殖抑制効果は20μM以上の高濃度でなければ認められなかった。これは加えたオリゴヌクレオチドの細胞内への移行の効率が悪いことが一因と考えられた。これほどの高濃度ではオリゴヌクレオチド自体の細胞毒性も認められることにより、細胞内への導入効率を高めることが望まれた。最近Penetratin 1というDrosophila antennapediaのDNA結合部位から単離されたペプチドが、細胞内へのオリゴヌクレオチド導入のベクターとして使用できるようになった。オリゴヌクレオチドをPenetratin 1とカップリングさせることにより、ほぼ100%細胞内に取り込ませることができると報告されており、従来のリポフェクション法より導入効率が高い。そこで、Penetratin 1をsrcmRNA、lckmRNA、yesmRNAに対するセンスまたはアンチセンスオリゴヌクレオチドと結合させ、SW620、SW480といった大腸癌細胞株の培養上清中に0.25nM〜128nMの濃度で加えた。しかし、Penetratin-オリゴヌクレオチドは、どの種類のものも全く細胞増殖を抑制しなかった。これはホスホロチオエ-ト化オリゴヌクレオチドを用いた実験結果と矛盾する結果である。その原因について現在検討中である。

在我们以前的实验中，已经表明，将反义寡核苷酸（磷酸硫酸盐）添加到SRCMRNA中，向结肠癌细胞系SW620抑制细胞增殖，但反义寡核苷酸可抑制lckMRNA和YESMRNA的反义寡核苷酸，并不表现出细胞增殖的抑制作用。然而，除非其高浓度为20μm或更多，否则不会观察到反义寡核苷酸抑制细胞增殖对SRCMRNA的效果。人们认为这部分是由于添加的寡核苷酸转移到细胞中的效率低下。在如此高的浓度下，还观察到寡核苷酸本身的细胞毒性，并且希望提高引入细胞的效率。最近，一种称为渗透蛋白1的肽，它是从果蝇的DNA结合位点分离出来的，已被用作细胞内寡核苷酸引入的载体。据报道，通过将寡核苷酸与穿透素1偶联，几乎可以将几乎100％的细胞掺入细胞中，并且比传统的脂外观方法更有效地转导。因此，将穿透素1与srCMRNA，LCKMRNA和YESMRNA的有义或反义寡核苷酸偶联，并以0.25 nm至128 Nm的浓度添加到结肠癌细胞系的培养上清液中，例如SW620和SW480。然而，没有任何穿透素 - 寡核苷酸完全抑制细胞增殖。这是使用磷酸硫酸寡核苷酸实验的矛盾结果。目前正在调查原因。