胚性幹細胞(ES細胞)の分化多能性維持機構におけるNanogの機能解析

Nanog在胚胎干细胞（ES细胞）多能性维持机制中的功能分析

• 批准号: 17790191
• 负责人: 中川 誠人
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790191/
• 关键词: ES細胞; 転写因子; Nanog; 未分化能維持機構; 初期胚発生

Nanogの機能を解析する為にNanog抗体を用いた免疫沈降とMass spectral analysisの解析を行なった。まず、Nanogの免疫沈降を行なう為にNanog抗体の作製、精製、と力価の検定等を行なった。得られた抗体を用いてES細胞の核抽出液よりNanogの免疫沈降を行なった。Immunoblot analysisによりNanogの免疫沈降が適正に行なわれたことを確認した。その後、実験の系をスケールアップしMassspectral analysisで解析できる量の免疫沈降産物の調整を行なった。SDS-PAGEを行ない銀染色によりNanog共沈降産物があることをコントロールと比べることで確認した。銀染色したゲルを切り出しMass spectral analysisを行なったところ多数のNanog結合蛋白質の同定に成功した。この中にはクロマチンのリモデリングに関わる因子が多く含まれていることが分かった。そのうちのいくつかの蛋白質とNanogの結合をimmunoblotにより確認したがはっきりとした結果は今のところ得られていない。さらなる解析を進める予定である。また、Nanog抗体を用いてNanogのクロマチン免疫沈降(Chip)を行ない、ES細胞の中でのNanogの標的遺伝子の同定を試みた。まずは、NanogのChipが上手くいくか条件検討を行った。非特異的なバンドの増幅が多く見られ、現在の条件ではNanog特異的な結合部位は同定できていない。バッファーの組成や、その他条件の再検討を進める予定である。

Nanog function analysis is performed for Nanog antibody use in Mass spectral analysis. The preparation, purification and characterization of Nanog antibody are carried out in the following ways: The antibody was used to extract ES cells from the nuclear extract. Immunoblot analysis confirms that Nanog's immune sedimentation is correct. After the analysis, the quality of the immune sedimentation products was adjusted. SDS-PAGE was performed to confirm the co-precipitation product. Silver staining was successful in identifying most Nanog binding proteins. The reason for this is that there are so many different kinds of drugs. The protein binding of Nanog was confirmed by immunoblot.さらなる解析を进める予定である。Nanog antibody was used to determine the identity of Nanog target proteins in ES cells.まずは、NanogのChipが上手くいくか条件検讨を行った。Non-specific binding sites are more common than Nanog binding sites. A review of the composition and other conditions of the company is scheduled.

项目成果

Mechanism for maintaining pluripotency in embryonic stem cells and inner cell mass.

维持胚胎干细胞和内细胞团多能性的机制。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Tanpakushitsu Kakusan Koso 50
• 作者: Nakagawa;M.
• 通讯作者: M.

Evolutionarily Conserved Non-AUG Translation Initiation in NATI/p97/DAP5 (EIF4G2).

NATI/p97/DAP5 (EIF4G2) 中进化保守的非 AUG 翻译起始。

• 发表时间: 2005
• 期刊: J.Biol.Chem. 280
• 作者: Amano;H.;Takahashi K.;Maruyama M.
• 通讯作者: Maruyama M.

IQGAP3, a novel effector of Rac1 and Cdc42, regulates neurite outgrowth

• DOI: 10.1242/jcs.03356
• 发表时间: 2007-02-15
• 期刊: JOURNAL OF CELL SCIENCE
• 影响因子: 4
• 作者: Wang, Shujie;Watanabe, Takashi;Kaibuchi, Kozo
• 通讯作者: Kaibuchi, Kozo

Identification and targeted disruption of the mouse gene encoding ESG1 (PH34/ECAT2/DPPA5).

编码 ESG1 (PH34/ECAT2/DPPA5) 的小鼠基因的鉴定和靶向破坏。

• 发表时间: 2006
• 期刊: BMC Dev.Biol. 6
• 作者: Amano;H.
• 通讯作者: H.

Differential membrane localization of ERas and Rheb, Two Ras-related proteins involved in the P13 kinase / mTOR pathway.

ERas 和 Rheb 的差异膜定位，这两种 Ras 相关蛋白参与 P13 激酶/mTOR 通路。

• 发表时间: 2005
• 期刊: J.Biol.Chem. 280
• 作者: Amano;H.;Takahashi K.
• 通讯作者: Takahashi K.