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ヒトT細胞白血病ウイルス2型(HTLV-2)によるT細胞不死化メカニズムの解明

阐明人 T 细胞白血病病毒 2 型 (HTLV-2) 的 T 细胞永生化机制

基本信息

批准号：
17790304
负责人：
樋口雅也
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Niigata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790304/
关键词：
HTLV-2 Tax2 NFAT HTLV-1 Tax1

项目摘要

成人T細胞白血病(ATL)はヒトT細胞白血病ウイルス1型(HTLV-1)が原因となる悪性の白血病であるが、HTLV-1とよく似たウイルスHTLV-2とATLとの関連は示されていない。しかし両ウイルスともin vitroでヒトT細胞を不死化することができることから、両者のトランスフォーミング蛋白Tax1、Tax2に何らかの機能の違いがあると考えられている。我々は、Tax2はNFATを恒常的に活性化しIL-2分泌を促進することにより感染細胞の増殖を導いていること、Tax1にはそのような活性は認められないことを見い出した。本研究ではTax2によるNFAT活性化の分子レベルでの解析によりHTLV-2によるT細胞不死化のメカニズムを解明することを目的とした。(1)NFAT活性化に関与するTax2会合分子の探索Tax2との会合分子をGST-Tax2融合蛋白を用いたヒトT細胞株からのpull down法さらに質量分析により同定を試みた。具体的にはヒトT細胞株の抽出液と、GST-Tax2およびネガティブコントロールとしてGST-Tax1融合蛋白を反応させ、それぞれの融合蛋白と結合する蛋白複合体を精製後、SDS-PAGE、CBB染色を行いGST-Tax2特異的に結合する蛋白質の有無を検討した。CBB染色のパターンを比較したところ、Tax2特異的に現れるバンドは検出できなかった。この結果から考えられ得ることは、Tax2にGSTを融合させることによりTax2のコンフォメーションに変化が生じ、目的とする蛋白質との会合がうまく進行しなかったという可能性である。より短いエピトープタグを付加したTax2を用いた精製が必要と考えられた。(2)NF-κB2/p100とTax2との関連性Tax1はNF-κB2/p100と結合し、p100からp52へのプロセッシングいわゆるNF-KBnoncanonicalpathwayを活性化する。Tax2においてその活性を検討したところ、Tax1とは異なりTax2にはp100プロセッシング活性が全くないことが明らかとなった。さらにTax2とp100との会合を免疫沈降法により検討したところ、Tax1とp100は細胞内で効率よく結合するが、Tax2とp100との結合は全くみられなかった。p100プロセッシングは癌ウイルスであるEBV、KSHV、HPVなどのトランスフォーミング蛋白によっても活性化されることが知られており、HTLV-1のみがATLを発症させる原因のひとつであると考えられた。

Adult T-cell leukemia (ATL) is the cause of T-cell leukemia type 1 (HTLV-1), HTLV-1 is the cause of ATL, and HTLV-2 is the cause of ATL. T cells are not killed in vitro, but in vitro. Tax1 and Tax2 are the functional components of T cells. Tax2 and IL-2 are constantly activated, and Tax1 and IL-2 are constantly activated. The aim of this study is to elucidate the molecular mechanisms of NFAT activation in Tax2 and HTLV-2 and T cell immortalization. (1) Study of Tax2 rendezvous molecules related to NFAT activation and its application in the pull-down analysis of GST-Tax2 fusion protein. Specifically, the presence or absence of GST-Tax2-specific binding protein was examined after purification of the protein complex from the extract of T cell line, GST-Tax2-specific binding protein and GST-Tax1 fusion protein, SDS-PAGE and CBB staining. CBB staining is a common phenomenon, and Tax2 specific staining is a common phenomenon. The result is that the fusion of Tax2 and GST is possible. The Tax rate is higher than the tax rate. (2) Correlation between NF-κ B2/p100 and Tax2. Tax1 activates NF-κB2/p100 and p52 along the noncanonical pathway. Tax2, Tax1, Tax2, Tax2, Tax3, Tax4, Tax5, Tax6, Tax7, Tax8, Tax9, Tax Tax2 and p100 are combined with each other in a single cell, and Tax1 and p100 are combined with each other in a single cell. The p100 protein is derived from EBV, KSHV, HPV, and other proteins. The protein is activated and the causes of ATL are discussed.