权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

新規炭疸菌検出法の開発と感染死の法医鑑定への応用

新型炭疽检测方法的研制及其在感染死亡法医学诊断中的应用

基本信息

批准号：
17790418
负责人：
藤浪良仁
金额：
$ 2.24万
依托单位：
National Research Institute of Police Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790418/
关键词：
炭疽菌感染症法医鑑定 γファージ異同識別

项目摘要

(目的)生物テロの危険性が高まるなか、炭疽菌は高い感染力・致死率・安定性を有し、最も生物兵器として利用しやすいことから、より高感度の検出法の開発が求められている。古典的な検査法として知られているガンマファージ感染テストは、その特異性及び検出感度が高いが、炭疽菌の分離同定及び培養を必要とするため判定までに時間がかかることが欠点であった。免疫抗体を用いたELISAや免疫ストリップによる測定は迅速であるが特異性及び検出感度においてガンマファージ感染テストに及ばない。よってファージ感染テストと同等の特異性を持ちELISAや免疫ストリップの迅速性をもつ高感度検出法の確立を目指した。(方法)炭疽菌に特異的に結合するガンマファージの蛋白質(PlyG)をコードする遺伝子をクローニングし、発現プラスミドに組込んだ。これを大腸菌に導入し、GST融合タンパク質として大量発現させ、精製した。ニトロセルロース膜上に陽性対照となる炭疽菌と陰性対照となる他のバチルス属をスポットし、GST融合PlyGを反応させた後、酵素標識した抗GST抗体を反応させた。これに発光基質を加えてシグナルを検出し、特異性、検出感度を検討した。同様に芽胞化培地を用いて炭疽菌及びバチルス属の枯草菌、セレウス菌の芽胞を作製し、特異性、検出感度を検討した。(成果)GST融合PlyGおよびPlyGB(結合領域のみ)、GSTを切り離したPlyGおよびPlyGBの精製に成功した。精製したGST融合PlyGBを用いて上記の方法で結合特異性・検出感度を調べたところ、陰性対照とは全く反応することなく、炭疽菌の栄養型を特異的に検出することが出来た。また炭疽菌芽胞においても発芽を介して特異的に検出することが明らかとなった。以上より、ガンマファージのPlyGの結合領域のみをもつPlyGBが炭疽菌認識に十分な活性をもつことが明らかとなった。以上の結果をまとめた投稿論文が掲載された。

Objective: To explore the development of detection methods for biological weapons with high risk, high infectivity, lethality and stability of anthrax. The classical detection method is used to determine the specificity and sensitivity of infection, isolation and culture of anthrax. Immunoantibody assay is rapid, specific and sensitive. The specificity of the ELISA and the rapidity of the ELISA are indicated by the establishment of a highly sensitive assay. (Method) Anthrax specific binding protein (PlyG) protein expression vector, development vector and protein expression vector. The introduction of E. coli, GST fusion, and purification The enzyme is identified by the enzyme PlyG. The light matrix is enhanced by detection, specificity and sensitivity. In the same way, the spore culture of Bacillus anthracis and Bacillus subtilis was studied in terms of production, specificity and sensitivity. (Results)GST fusion PlyG GST-fused PlyGB was purified using the method described above, and the specificity, sensitivity, and specificity of PlyGB were detected. The spore of Anthracnose is a special kind of spore. The above mentioned PlyG and PlyGB are very active in the field of anthrax recognition. The above results are published in the papers submitted.