臨床で認められた遺伝子変異を応用したHCV増殖制御機構の解明

利用临床观察到的基因突变阐明HCV生长控制机制

• 批准号: 17790445
• 负责人: 板倉 潤
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: University of Yamanashi
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790445/
• 关键词: HCVレプリコン; NS5A; 臨床症例; C型肝炎ウイルス; レプリコン; インターフェロン; リバビリン

・本研究では最新のHCV (C型肝炎ウイルス,Hepatitis C Virus)レプリコン系を用いて、臨床症例で認められた種々のHCV遺伝子変異による変化を解析し、臨床データから得られた知見を培養細胞系で再現、これによりHCV遺伝子変異によるHCV増殖制御機構及びそのダイナミズムを解明し、さらにインターフェロン/リバビリン治療抵抗性機序を解明することを目的とした。HCV遺伝子の中でも、特にHCV-NS5A蛋白の変異に注目して解析した。すなわち、NS5A領域に存在するlnterferon Sensitivity Determining Region (ISDR, aa.2209-2248)のアミノ酸変異数は、血中ウイルス量・インターフェロン(IFN)感受性を規定する主要な因子である(N Engl J Med 1995)。さらに、ISDRの特定の部位のアミノ酸変異がIFN治療効果と密接に関連している(J Infect Dis,2001)。一方、HCV複製増殖細胞モデルであるHCVレプリコンにおいても、ISDRへの変異導入により増殖能が大きく変化し、in-vitroにおいてもISDRがウイルス増殖に関連していることが見出されている。しかしISDRのどの部位のアミノ酸変異がHCVレプリコン増殖において機能上重要なのか明らかにはされていない。我々はウイルス量、およびIFN治療効果の異なる様々な臨床症例から得られたHCVのISDR配列をHCVレプリコンに組み込んで、増殖に影響を与えるISDRの遺伝子構造について系統的に解析した。まず臨床上IFN無効症例、著効症例から得られた様々なNS5A-ISDR配列をレプリコンに組み込み、レプリコンの増殖変化を検討したところ、著効症例から得られた、多数の変異をもつISDRをHCVレプリコンに導入した場合にレプリコンの増殖能は著明に上昇したが、無効症例から得られた殆ど変異のないISDRをHCVレプリコンに導入しても、レプリコンの増殖能は上昇しなかった。次にこれらの変異の中でも、どの変異部位が増殖を規定するcriticalな部位であるのかmutagenesisによる変異導入によって決定を試みた。するとISDR内40アミノ酸において、臨床的観察から最もIFN感受性とウイルス増殖に関連が強いと推察されたアミノ酸2209番目にアミノ酸変異を導入した場合に、HCVレプリコン増殖能は劇的に亢進した。これらの結果からは、ISDRの特定のアミノ酸の変異はHCVの増殖能、およびIFN感受性に関連すること、さらにこれらの解析がin-vitroのHCVレプリコンで可能であること、さらにHCVレプリコンを用いたIFN抵抗性機序解明の可能性、さらにレプリコンを用いたHCV治療効果予測システムの構築などが可能であるものと考えらえられた。

·This study is the latest HCV (Hepatitis C Virus) Hepatitis C virus (HCV) gene system development, clinical diagnosis, identification of HCV gene variants, analysis of HCV gene variants, clinical diagnosis, identification of HCV gene variants, reproduction of HCV cell lines in culture, identification of HCV gene variants, HCV propagation control mechanisms, and identification of HCV gene variants To understand the mechanism of resistance to treatment, we need to focus on the following: Analysis of HCV NS5A protein in HCV genome NS5A domain exists in the following regions: Sensitivity Determination Region (ISDR, aa.2209-2248), which determines the main factors for determining the sensitivity to IFN (N Engl J Med 1995). In addition, the effect of IFN therapy on specific sites of ISDR is closely related to the presence of different acids (J Infect Dis,2001). On the one hand, HCV replication in cells is associated with HCV replication in cells, and ISDR is associated with HCV replication in cells. In addition, the functional importance of HCV replication in the development of ISDR is also discussed. We analyzed the differences in the amount and effect of IFN therapy in clinical cases, including the effects of HCV ISDR alignment, HCV replication, and ISDR gene structure. In clinical practice, IFN has no symptoms, no symptoms, no changes in the NS5A-ISDR alignment, no changes in the ISDR alignment. The growth rate of rice and rice can be increased. In addition to the above, the author also tries to determine the critical position of mutation. In ISDR, 40 cases of HCV infection were detected, and the correlation between IFN sensitivity and HCV proliferation was analyzed. The results show that the variation of ISDR specific RNA is related to HCV replication, IFN susceptibility and HCV replication potential.

项目成果

Viral load change and sequential evolution of entire hepatitis C virus genome in Irish recipients of single source-contaminated anti-E immunoglobulin.

爱尔兰单一来源污染的抗 E 免疫球蛋白受体中整个丙型肝炎病毒基因组的病毒载量变化和顺序进化。

• 发表时间: 2005
• 期刊: J Viral Hepatitis 12・6
• 作者: Itakura J;Nagayama K;Enomoto N;Hamano K;Sakamoto N;Fanning LJ;Kenny-Walsh E;Shanahan F;Wanatabe M
• 通讯作者: Wanatabe M