発癌におけるDNA低メチル化の役割に関する研究

DNA低甲基化在癌变中的作用研究

• 批准号: 17790449
• 负责人: 上田 佳秀
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790449/
• 关键词: DNAメチル化; DNMT1; 大腸癌; Dnmt3b; ICF症候群

DNMT1は維持メチル化酵素と呼ばれ、細胞分裂の際にDNAメチル化を維持するために作用する酵素である。マウスにおいては、Dnmt1の欠失によってほぼすべてのDNAメチル化が消失し、初期胎生致死となることが明らかとなっている。今回我々は、大腸癌細胞株を用い、DNMT1のコンディショナルノックアウト細胞を作製することにより、大腸癌細胞におけるDNAメチル化の役割を明らかにすることを目的とし、以下の解析を行った。大腸癌細胞株HCT116において、DNMT1の機能ドメインをloxP配列で挟んだノックインベクターを用い、相同組み換えを生じさせることよつて、コンディショナルにDNMT1を欠失させることが可能なアレルをもつ細胞を作成した。これを2回繰り返すことによって、DNMT1のコンディショナルノックアウト細胞を作成した。この細胞にCreを発現させ、DNMT1を欠失させたところ、ゲノム全体のDNAメチル化が低下し、それに伴って細胞増殖が停止した。詳細な解析により、細胞のDNAメチル化の消失に伴ってG2/Mチェックポイントが活性化され、G2期で細胞分裂が停止することが明らかとなった。さらに、その後の異常な有糸分裂への進行に伴って、様々な染色体異常やセントロメアの増幅を伴い、細胞死(mitotic catastrophe)が誘導されることが明らかとなった。これらの結果より、大腸癌細胞の増殖と生存においてDNAメチル化が必須であることが明らかとなった。

DNMT1 maintains the function of enzyme in cell division. Dnmt1 is a missing DNA fragment that disappears during early fetal life. This paper describes the use of DNMT1 in colorectal cancer cell lines and the analysis of DNMT1 in colorectal cancer cell lines. Colorectal cancer cell line HCT116 is a cell line that has been successfully constructed with DNMT1 in the presence of loxP. 2. The number of cells in a cell is 100. The cells were detected, DNMT1 was not detected, and all DNA fragments were reduced and cell proliferation was stopped. Detailed analysis of cell DNA fragmentation, accompanied by G2/M activation, G2 phase, cell division arrest, etc. In addition, there are some abnormalities in chromosome division, such as chromosome abnormality, mitotic catastrophe, and so on. The result is that colorectal cancer cells must grow and survive.

项目成果

Roles of Dnmt3b in mammalian development : a mouse model for the ICF syndrome

Dnmt3b 在哺乳动物发育中的作用：ICF 综合征小鼠模型

• 发表时间: 2006
• 期刊: Development 133・6
• 作者: Yoshihide Ueda;Masaki Okano;Christine Williams;Taiping Chen;Katia Georgopoulos;En Li
• 通讯作者: En Li

Complete inactivation of DNMT1 leads to mitotic catastrophe in human cancer cells

• DOI: 10.1038/ng1982
• 发表时间: 2007-03-01
• 期刊: NATURE GENETICS
• 影响因子: 30.8
• 作者: Chen, Taiping;Hevi, Sarah;Li, En
• 通讯作者: Li, En

Inactivation of Dnmt3b in mouse embryonic fibroblasts results in DNA hypomethylation, chromosomal instability, and spontaneous immortalization

• DOI: 10.1074/jbc.m413246200
• 发表时间: 2005-05-06
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Dodge, JE;Okano, M;Li, E
• 通讯作者: Li, E