心筋・平滑筋特異的転写因子myocardinを制御する分子の同定と機能解析

控制心肌和平滑肌特异性转录因子心肌素的分子的鉴定和功能分析

• 批准号: 17790488
• 负责人: 河合 美樹
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790488/
• 关键词: 心筋; 転写因子; myocardin; 分化; アボトーシス

1.心筋細胞発生・分化における転写因子FHL2とmocardinの相互作用の解明心筋・平滑筋細胞に特異的に発現するmyocardinは、serum response factor(SRF)と結合しserum response element(SRE)を活性化する転写コファクターとしてOlsonおよびUeyamaにより同定された。我々はmyocardinと結合する分子をyeast two-hybrid法でスクリーニングし、FHL2(four and one half LIM domain2)を一つの候補として同定した。FHL2は心筋特異的に発現し、細胞分化や細胞骨格に関わる。我々はANF遺伝子のプロモーター領域を用いたレポーター・アッセイで、SRFによる転写活性をmyocardinが増強するのをFHL2が抑制することを明らかにした。しかし培養細胞を用いた免疫沈降法では、myocardinとFHL2の直接結合は明らかでなかった。今後さらにmyocardin、SRF、FHL2の相互関係につき研究を行う。2.Myocardinが心筋細胞のアポトーシスに及ぼす影響の検討申請者らはmyocardinが心筋肥大因子として作用することを見いだしている。心筋肥大に関する多くの因子が抗アポトーシス因子として働くと報告されており、myocardinも心筋細胞に対し抗アポトーシス分子として働くと仮説をたて、ラット培養心筋細胞を用い実験を行った。アデノウイルスを用いた心筋細胞でのmyocardinの過剰発現は、caspase-3の活性増加を伴うβアドレナリン刺激による心筋細胞のアポトーシスを抑制した。myocardinは、心筋細胞内のBcl-2の発現を転写レベルより増加させ、アポトーシスを抑制していることが判明した。一方、myocardinのdeletion mutant(ドミナントネガティブ体)の発現によりアポトーシスは増加した。さらに、myocardinのドミナントネガティブ体トランスジェニックマウスを作製し心機能における役割について検討中である。

1. The interaction of FHL2 and mocardin during development and differentiation of muscle cells is explained by the activation of myocardin, serum response factor(SRF) and serum response element (SRE). The myocardin binding molecule is a yeast-two-hybrid method, and FHL2 (four and one half LIM domain2) is a candidate. FHL2 is related to the development of specific cells, cell differentiation and cell skeleton. We have a strong myocardin activity and a strong inhibition of FHL2 activity in the ANF gene domain. Cultured cells were treated with immuno-sedimentation and myocardin FHL2 directly. In the future, the relationship between myocardins, SRF and FHL2 will be studied. 2. Myocardin affects the development of cardiac hypertrophy factors. The heart muscle hypertrophy related factors include anti-tumor factors, myocard-related factors, anti-tumor factors and anti-tumor factors. The increase of caspase-3 activity was accompanied by the inhibition of the expression of myocardin in the cardiac muscle cells. The expression of Bcl-2 in myocardin and cardiac muscle cells was found to increase and decrease. On the other hand, the occurrence of deletion mutant of myocardins has increased. In addition, myocardins can also be used to control heart function.