成人異型肺炎由来マイコプラズマにおけるマクロライド薬耐性化に関する分子疫学研究

成人非典型肺炎支原体大环内酯类耐药的分子流行病学研究

• 批准号: 17790539
• 负责人: 諸角 美由紀
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790539/
• 关键词: M.pneumoniae; real-time PCR; Cycling probe; 迅速診断; 呼吸器感染症; Molecular beacon probe

1)成人由来のマイコプラズマ・ニューモニエの分離と薬剤感受性の測定成人マイコプラズマ研究会に参加する7施設より検査材料の送付を受け,マイコプラズマ(M.pneumoniae)を含む呼吸器感染症の主要な原因菌である6菌種に対するreal-time PCRを実施した。そのうち,マイコプズマに対するPCRが陽性であった検体に対しては,マイコプラズマ分離のための培養も実施し,分離後に薬剤感受性も測定した。2005年4月から2007年2月の期間に合計161検体の送付を受け,対象患者の平均年齢は48歳(16歳〜95歳)であった。PCR陽性例の内訳は,マイコプラズマが26.1%,肺炎球菌が16.1%,インフルエンザ菌が9.9%,A群溶血レンサ球菌が1.9%,レジオネラが0.6箔であった。培養で分離された25株のマイコプラズマに対するマクロライド系薬感受性はすべて感性で,小児由来株のように明らかな耐性株は認められなかった。2)Cycling probeを用いるreal-time PCR法の確立昨年,molecular beacon probeを用いるreal-time PCR法を確立したが,さらに高い感度と特異度でマイコプラズマが検索可能なcycling probeを用いるreal-time PCR法を確立した。DNA増幅用primerとprobeは,16S rRNA遺伝子上に設計した。DNAの増幅は,95℃:5秒,55℃:15秒,72℃:20秒/cycleの反応条件で40サイクルとした。検査材料受付後,結果判明までの所要時間は1.5時間であった。PCRと培養との比較成績におけるPCRの感度は100%,特異度は95.6%と高かった。PCR陽性と判定され,マイコプラズマに対する抗体価が測定された症例は,そのほとんどで抗体価が有意に上昇していた。今後もマイコプラズマの収集を行い,小児との耐性化の違いについて,疫学調査を実施したいと考える。

1)Adult origin, isolation, susceptibility determination, and real-time PCR were performed for six strains of bacteria that are the main cause of respiratory infections, including M. pneumoniae, in the 7-facility study group for adult origin. The results of PCR were positive, and the results of PCR were negative. During the period from April 2005 to February 2007, a total of 161 cases were delivered, and the average age of the patients was 48 years (16 years to 95 years). PCR positive cases were 26.1%, 16.1%, 9.9%, 1.9%, 0.6%. 25 strains were isolated and identified as susceptible, while the rest were identified as resistant. 2)Cycling probe was established by real-time PCR. Molecular beacon probe was established by real-time PCR. DNA amplification using primer and probe, 16S rRNA gene design. DNA amplification: 95 ℃: 5 s, 55 ℃: 15 s, 72 ℃: 20 s/cycle After examining the materials received, it was found that the required time was 1.5 hours. PCR sensitivity was 100% and specificity was 95.6%. PCR positive determination of antibody levels in the case of In the future, the collection of small children will be carried out, and the epidemic investigation will be carried out

项目成果

呼吸器感染症の起因菌迅速同時検出法

呼吸道感染细菌的快速同时检测方法

• 发表时间: 2006
• 期刊: 臨床病理レビュー特集号 134
• 作者: 諸角 美由紀;青木 泰子;生方公子
• 通讯作者: 生方公子