心臓におけるミネラルコルチコイド受容体(MR)作用の分子機構の検討

盐皮质激素受体（MR）在心脏中作用的分子机制研究

• 批准号: 17790631
• 负责人: 小林 佐紀子
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790631/
• 关键词: ミネラルコルチコイド受容体; Yeast two-hybrid system; アルドステロン

ミネラルコルチコイドであるアルドステロンは、正常食塩摂取下では、腎臓の皮質部集合管細胞に作用して、ナトリウム、カリウムの調節を主に行う生体に不可欠なホルモンであるが、高食塩摂取下では、血管の炎症や心臓線維化などを惹起することが知られている。そこで、本研究では、心臓におけるミネラルコルチコイド受容体(MR)結合蛋白から心臓リスクホルモンとしての役割を明らかにすることを目的とした。まずヒト心臓mRNAよりGal4 activation domainとligationさせたヒト心臓cDNAライブラリーを作製した。次に前記ライブラリーを用い、Yeast two-hybrid systemを用いてMR結合蛋白のスクリーニングを行った。約20種類のクローンが得られたが、DNA sequenceの結果、それらは全て同一の既報蛋白のC末端部分を含むクローンであることが明らかになった。その中でも最も長い部分を含むC末端のクローン(MRP-1と命名)は、イースト内ではホルモン非存在下ではMRと結合を認めず、アルドステロン、コルチゾール、スピロノラクトン存在下でMRと特異的な結合を認めた。またmammalian Two hybrid法の結果、哺乳類細胞HEK293細胞およびCOS-7細胞において、ホルモン非存在下でMRとの強い結合を認め、アルドステロン、コルチゾール存在下では強い結合が持続し、スピロノラクトン存在下では結合が減弱することが確認された。さらにMRP-1はCOS-7細胞において3xMRE-E1b-lucレポーターおよびMRとともに過剰発現させた場合、MRによる転写活性を減弱することが確認された。また、MRP-1の組織分布は、心臓に特異的に発現することから、心臓におけるアルドステロン作用に抑制的に機能する蛋白であることが示唆された。

"Normal diet" removes the role of cortical collecting duct cells in the kidney and regulates their regulation."High diet" removes the role of vascular inflammation and cardiovascular maintenance. The purpose of this study is to develop receptor binding protein (MR) in the heart of a patient. Gal4 activation domain and ligations are controlled by cDNA. The second is to use the Yeast two-hybrid system to detect MR binding protein. About 20 kinds of DNA sequences were obtained, and the results showed that the C-terminal part of the same reported protein was completely changed. In the middle part of the body, the most important part contains the C-terminal protein (MRP-1). In the absence of the protein, MR binding is recognized. In the absence of the protein, MR binding is recognized. In the presence of the protein, MR binding is recognized. The results of mammalian Two hybrid method, mammalian cells HEK293 cells and COS-7 cells in the absence, absence, strong MR binding, absence, strong MR binding in the presence, and weak MR binding in the presence of mammalian cells. In addition, MRP-1 COS-7 cells were identified as having decreased activity in the presence of MR. The tissue distribution of MRP-1 is related to the expression of proteins that are specific to the heart and inhibit the function of the heart.

项目成果

原発性アルドステロン症の診断におけるアルドステロン/レニン比の意義

醛固酮/肾素比值在原发性醛固酮增多症诊断中的意义

• 发表时间: 2006
• 期刊: ホルモンと臨床 54巻・1号
• 作者: Shinoda Y;Yamaguchi M;Ogata N;Akune T;Kubota N;Yamauchi T;Terauchi Y;Kadowaki T;Takeuchi Y;Fukumoto S;Ikeda T;Hoshi K;Chung UI;Nakamura K;Kawaguchi H;柴田洋孝;広松雄治;Hayashi T;Shinoda Y et al.;広松雄治;柴田洋孝
• 通讯作者: 柴田洋孝

原発性アルドステロン症の病型:生化学的立場から

原发性醛固酮增多症的病理类型：从生化角度

• 发表时间: 2005
• 期刊: 内分泌・糖尿病科 21巻・3号
• 作者: 三宅育代;賀来寛雄;広松雄治;Fukushima N et al.;Nagayama Y;柴田洋孝
• 通讯作者: 柴田洋孝