多発性骨髄腫におけるメルファラン輸送を介した抗癌剤耐性機序の研究

骨髄腫細胞株KHM-11においてはトランスフェクション試薬による細胞障害が強く効率の良いsiRNAの導入が困難であることが判明しており、トランスフェクションの実績が豊富である骨髄腫細胞株RPMI8226を使用しLAT1/4F2 heavy chain (4F2hc)の抑制実験を行った。LAT1/4F2 heavy chain (4F2hc)の抑制効果が確認されているStealth^<TM> Select RNAi, SLC3A2-HSS109826 (Invitrogen)をLipofectamine^<TM> 2000(Invitrogen)を用いて濃度250nMで導入したところ、同濃度のnegative control(Stealth^<TM> RNAi Negative Control Medium GC Duplex, Invitrogen)を導入した細胞と比較しCD98(4F2hc)の発現低下が認められた(導入48時間後にフローサイトメトリーにてCD98の発現強度を測定し、siRNA導入細胞でmean fluorescence intensityが平均66.4%低下)。この細胞を用いて14C-Melphalan(Moravek Biochemicals, Inc)の取り込みを測定したところ、トランスフェクション試薬のみ暴露した細胞とnegative controlでは有意差を認めなかったが(p=0.61)、siRNA導入細胞ではnegative controlと比較し14C-Melphalanの取り込みが73.2%と有意に低下していた(p=0.005)。この結果より骨髄腫細胞株RPMI8226においてメルファランの取り込みはLAT1/4F2 heavy chain (4F2hc)を介して行われていることが示され、このため4F2hcの発現低下がメルファラン耐性の一因となると考えられた。

骨髄腫細胞株KHM-11においてはトランスフェクション試薬による細胞障害が強く効率の良いsiRNAの導入が困難であることが判明しており、トランスフェクションの実績が豊富である骨髄腫細胞株RPMI8226を使用しLAT1/4F2 heavy chain (4F2hc)の抑制実験を行った。LAT1/4F2 heavy chain (4F2hc)の抑制効果が確認されているStealth^<TM> Select RNAi, SLC3A2-HSS109826 (Invitrogen)をLipofectamine^<TM> 2000(Invitrogen)を用いて濃度250nMで導入したところ、同濃度のnegative control(Stealth^<TM> RNAi Negative Control Medium GC Duplex, Invitrogen)を導入した細胞と比較しCD98(4F2hc)の発現低下が認められた(導入48時間後にフローサイトメトリーにてCD98の発現強度を測定し、siRNA導入細胞でmean fluorescence intensityが平均66.4%低下)。この細胞を用いて14C-Melphalan(Moravek Biochemicals, Inc)の取り込みを測定したところ、トランスフェクション試薬のみ暴露した細胞とnegative controlでは有意差を認めなかったが(p=0.61)、siRNA導入細胞ではnegative controlと比較し14C-Melphalanの取り込みが73.2%と有意に低下していた(p=0.005)。この結果より骨髄腫細胞株RPMI8226においてメルファランの取り込みはLAT1/4F2 heavy chain (4F2hc)を介して行われていることが示され、このため4F2hcの発現低下がメルファラン耐性の一因となると考えられた。