Aurora及びFlt3キナーゼを標的とした新規分子標的薬剤の臨床的開発

Auroraキナーゼは細胞分裂において、その分裂期に触媒活性のピークを迎える分裂期キナーゼであり、細胞分裂を遂行する中心的な酵素である。ヒトおよびマウスには3種類のaurora遺伝子が存在し、aurora A, B, Cと名付けられており、中でもaurora A遺伝子はヒト染色体20q13.31に存在するが、この部位は様々な癌で遺伝子増幅の見られる領域であることから、癌遺伝子の存在が示唆されている。本研究ではAuroraキナーゼを介在した造血期腫瘍の新しい分子標的療法を開発し、臨床的に効果のある治療法の確立を目指す。Vertex社との共同研究により、Auroraキナーゼ及びBCR-ABLキナーゼの双方を分子標的とするVX-680 (Nature Med 10:262-267)の難治性急性白血病に対する有用性を検証し、早期の臨床応用を目指す。本研究ではT315I BCR-ABL陽性白血病細胞をNOD/SCIDマウスに移植し、BCR-ABL陽性白血病モデルマウスに対するVX-680の有効性、薬剤耐性獲得について検証する。(1)VX-680耐性白血病細胞株の作成及びVX-680耐性機構の解析:Flt3-ITD陽性白血病細胞株MV4-11を10nMから低濃度で8週間培養し、メチルセルロース法にてコロニー採取を行った。VX-680 10μMにても増殖可能になった場合、VX-680耐性株と判断しVX-680耐性MV4;11細胞を樹立した。同様に、BCR-ABL陽性K562細胞株をVX-680 10nMより培養開始しVX-680 10μM耐性K562細胞株を樹立した。(2)T315IBCR-ABL発現BaF3細胞におけるVX-680のin vitro及びin vivoでの有効性の解析:T315IBCR-ABL発現BaF3細胞を用いてVX680のBCR-ABLチロシンキナーゼ抑制効果について解析した。VX-680 5μMにてT315IBCR-ABL変異チロシンキナーゼを抑制した。T315IBCR-ABL発現BaF3細胞を移植した白血病マウスではVX-680 75mg/kg投与にて白血病細胞の増殖抑制及び白血病マウス生存期間の延長が確認された。

Auroraキナーゼは細胞分裂において、その分裂期に触媒活性のピークを迎える分裂期キナーゼであり、細胞分裂を遂行する中心的な酵素である。ヒトおよびマウスには3種類のaurora遺伝子が存在し、aurora A, B, Cと名付けられており、中でもaurora A遺伝子はヒト染色体20q13.31に存在するが、この部位は様々な癌で遺伝子増幅の見られる領域であることから、癌遺伝子の存在が示唆されている。本研究ではAuroraキナーゼを介在した造血期腫瘍の新しい分子標的療法を開発し、臨床的に効果のある治療法の確立を目指す。Vertex社との共同研究により、Auroraキナーゼ及びBCR-ABLキナーゼの双方を分子標的とするVX-680 (Nature Med 10:262-267)の難治性急性白血病に対する有用性を検証し、早期の臨床応用を目指す。本研究ではT315I BCR-ABL陽性白血病細胞をNOD/SCIDマウスに移植し、BCR-ABL陽性白血病モデルマウスに対するVX-680の有効性、薬剤耐性獲得について検証する。(1)VX-680耐性白血病細胞株の作成及びVX-680耐性機構の解析:Flt3-ITD陽性白血病細胞株MV4-11を10nMから低濃度で8週間培養し、メチルセルロース法にてコロニー採取を行った。VX-680 10μMにても増殖可能になった場合、VX-680耐性株と判断しVX-680耐性MV4;11細胞を樹立した。同様に、BCR-ABL陽性K562細胞株をVX-680 10nMより培養開始しVX-680 10μM耐性K562細胞株を樹立した。(2)T315IBCR-ABL発現BaF3細胞におけるVX-680のin vitro及びin vivoでの有効性の解析:T315IBCR-ABL発現BaF3細胞を用いてVX680のBCR-ABLチロシンキナーゼ抑制効果について解析した。VX-680 5μMにてT315IBCR-ABL変異チロシンキナーゼを抑制した。T315IBCR-ABL発現BaF3細胞を移植した白血病マウスではVX-680 75mg/kg投与にて白血病細胞の増殖抑制及び白血病マウス生存期間の延長が確認された。