デュシャンヌ型筋ジストロフィーのアンチセンス治療法に関する分子メカニズムの解明

阐明反义疗法治疗杜氏肌营养不良症的分子机制

• 批准号: 17790703
• 负责人: 羽原 靖晃
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790703/
• 关键词: mRNAスプライシング; 遺伝子発現制御; 筋ジストロフィー; 分子生物学; スプライシング

昨年度の研究成果から、SAP145のRNAへの結合特異性がRNA配列にほとんど依存しないことが判明し、SAP145とdys-ESE19の結合特異性だけでアンチセンス治療法のメカニズムを説明することが困難となった。そこで本年度は、さらに元となる疑問まで立ち返り、そもそもエクソン19はなぜdys-ESE19を必要とするのか?、に関する研究を行った。昨年度作成したエクソン18-19-20からなるスプライシング解析用レポーター遺伝子を改変し、エクソン19上流のスプライスコンセンサス配列の一部であるポリピリミジントラクトに関して、dys-ESE19存在下、非存在下での配列要求性を解析した。驚いたことに、dys-ESE19存在下では、必須とされていたポリミジントラクトに配列要求性がほとんど見られず、ポリプリン以外ならどのような配列でも正常にスプライシングされることが判明した。このことは、培養細胞でレポーター遺伝子を発現させる実験で判明した事実であるが、同様の実験を無細胞系(in vitro splicing)で行ったところ、無細胞系ではESE活性が細胞内より低く評価された。これらより、1.エクソンにESEが存在する場合、上流側ポリピリミジントラクトはほとんど必要ない2.ポリピリミジントラクトの重要性が本来より高く評価されていた理由は、これまでのスプライシング実験の多くが無細胞系で行われていたためと推定されるの2点が明らかとなり、また、今回の結果をもとにジストロフィン遺伝子の配列を検索した結果、3.ジストロフィン遺伝子の全79エクソンのうち、約3分の2はESEに依存してスプライシングされると推定される、即ち、アンチセンス治療法のターゲットになりうることを明らかにした。

Yesterday's annual の research か ら, SAP145 の RNA へ の combining with specific が RNA with に ほ と ん ど dependent し な い こ と が.at し, SAP145 と dys - ESE19 の combining specific だ け で ア ン チ セ ン ス therapy の メ カ ニ ズ ム を illustrate す る こ と が difficult と な っ た. そ こ で は this year, さ ら に yuan と な る doubt ま で ち to return り, そ も そ も エ ク ソ ン 19 は な ぜ dys - ESE19 を necessary と す る の か? Youdaoplaceholder0 is related to する research を line った. Last year made し た エ ク ソ ン 18 to 19-20 か ら な る ス プ ラ イ シ ン グ parsing using レ ポ ー タ ー posthumous son 伝 を change - し, エ ク ソ ン 19 high の ス プ ラ イ ス コ ン セ ン サ ス match column の a で あ る ポ リ ピ リ ミ ジ ン ト ラ ク ト に masato し て, dys - ESE19 the presence and the presence of で の with sex column を parsing し た. Jing い た こ と に, dys - the presence of ESE19 で は, must と さ れ て い た ポ リ ミ ジ ン ト ラ ク ト に with sex column が ほ と ん ど see ら れ ず, ポ リ プ リ ン outside な ら ど の よ う な match column で も normal に ス プ ラ イ シ ン グ さ れ る こ と が.at し た. こ の こ と は, culture cell で レ ポ ー タ ー posthumous son 伝 を 発 now さ せ る be 験 で.at し た things be で あ る が, with others in の be 験 を no cell line (in vitro splicing) line で っ た と こ ろ, no cell line で は ESE active が intracellular よ り low く review 価 さ れ た. こ れ ら よ り, 1. エ ク ソ ン に ESE が exist す る occasions, upper side ポ リ ピ リ ミ ジ ン ト ラ ク ト は ほ と ん ど necessary な い 2. ポ リ ピ リ ミ ジ ン ト ラ ク ト の importance が originally よ り high く review 価 さ れ て い た reason は, こ れ ま で の ス プ ラ イ シ ン グ be 験 の more く で が no cell line わ れ て い た た め と presumption さ れ る の 2 PM が Ming ら か と な り, ま た, today back to の results を も と に ジ ス ト ロ フ ィ ン heritage 伝 の match sequence を 検 cable し た results, 3. ジ ス ト ロ フ ィ ン heritage 伝 son の all 79 エ ク ソ ン の う ち, about 3 minutes の 2 は ESE に dependent し て ス プ ラ イ シ ン グ さ れ る と presumption さ れ る, namely ち, ア ン チ セ ン ス therapy の タ ー ゲ ッ ト に な り う Youdaoplaceholder0 に とを Ming ら に に た.

项目成果

スプライシング解析用ベクター

用于剪接分析的载体

• 发表时间: 2006

A nonsense mutation-created intraexonic splice site is active in the lymphocytes, but not in the skeletal muscle of a DMD patient

• DOI: 10.1007/s00439-006-0241-y
• 发表时间: 2007-01-01
• 期刊: HUMAN GENETICS
• 影响因子: 5.3
• 作者: Tran, Van Khanh;Takeshima, Yasuhiro;Matsuo, Masafumi
• 通讯作者: Matsuo, Masafumi

Splicing analysis disclosed a determinant single nucleotide for exon skipping caused by a novel intraexonic four-nucleotide deletion in the dystrophin gene

• DOI: 10.1136/jmg.2006.042317
• 发表时间: 2006-12-01
• 期刊: JOURNAL OF MEDICAL GENETICS
• 影响因子: 4
• 作者: Tran, Van Khanh;Takeshima, Yasuhiro;Matsuo, Masafumi
• 通讯作者: Matsuo, Masafumi

A novel cryptic exon identified in the 3′ region of intron 2 of the human dystrophin gene

• DOI: 10.1007/s10038-005-0272-6
• 发表时间: 2005-09-01
• 期刊: JOURNAL OF HUMAN GENETICS
• 影响因子: 3.5
• 作者: Tran, VK;Zhang, ZJ;Matsuo, M
• 通讯作者: Matsuo, M