心臓発生における細胞内イノシトール三リン酸-カルシウム系の役割

细胞内肌醇三磷酸钙系统在心脏发育中的作用

• 批准号: 17790722
• 负责人: 内田 敬子
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790722/
• 关键词: 心臓発生; 細胞内カルシウムシグナル; イノシトール三リン酸受容体; 遺伝子工学

胎生9.5日から10.5日の1型・2型IP_3Rダブルノックアウトマウス(DKO)を用いて、1)whole-mount in situ hybridization(WISH)法による心臓部位特異的マーカーの発現の観察、2)免疫組織化学法による心内膜細胞マーカーの発現とアルシアンブルー染色による心ゼリーの観察を行い、以下の結果を得た。1.1型・2型IP_3RDKOと同腹の正常対照において、胎仔心臓全体のマーカーであるNkx2.5,MLC2a, MLC2v,右心室のマーカーであるdHAND,左心室のマーカーであるeHAND,房室管のマーカーであるTbx2の発現を比較した。Digラベルしたプローブを用いたWISH法を行い、すべてのマーカーで発現様式に差は認められなかった。2.房室接合部心内膜細胞のマーカーであるNFATc1の発現を免疫組織化学法によって観察した。また、酸性ムコ多糖類を青染するアルシアンブルー染色で心ゼリーの形成を確認した。同腹の正常対照と比較して1型・2型IP_3RDKOにおいても、心内膜細胞にはNFATclの発現が認められ、アルシアンブルー染色の染色強度も同程度であった。しかし、心内膜細胞におけるNFATclの発現は経時的に低下し、心内膜細胞から形質転換し心ゼリー内に侵入する間葉系細胞の数は1型・2型IP_3RDKOにおいて有意に低かった。以上の結果および昨年度の結果より、1型・2型IP_3RDKOの胎仔心臓は、初期ルーピングまでは正常に発生し、心房、房室管、心室の領域化はほぼ完成しているが、心内膜床の形成不全をきたしていること、心内膜床の間葉系細胞の減少から心内膜上皮一間葉転換に異常があることが示唆された。

The following results were obtained: 1) The development of heart site-specific myocytes by whole-mount in situ hybridization(WISH) method; 2) The development of endocardial myocytes by immunohistochemistry method. 1.1 Type 2 IP_3RDKO and normal contrast of the same abdomen, fetal heart disease, Nkx2.5, MLC2a, MLC 2v, right ventricle, left ventricle, atrioventricular duct, Tbx2 Dig into the WISH method, and then you'll find out what's going on. 2. Immunohistochemical detection of NFATc1 in atrioventricular junctional endocardial cells To confirm the formation of acid polysaccharide by staining. The staining intensity of NFATcl in endocardial cells was different from that in normal controls. NFATcl expression in endocardial cells was lower during the period of endocardial invasion, and the number of mesenchymal cells of type 1 and type 2 IP_3RDKO was lower on purpose. These results are consistent with those of the previous year. Type 1 and type 2 IP_3RDKO fetal heart failure, early stage of heart failure, complete localization of atria, atrioventricular ducts, and ventricles, incomplete formation of endocardial bed, reduction of mesenchymal cells in endocardial bed, and abnormal endocardial epithelial mesenchymal transition are all indicated.