NO合成遺伝子導入によるクローン病腸管狭窄予防に関する研究

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本研究の目的は、腸管を標的臓器にした直接的遺伝子導入によってクローン病腸管の狭窄、炎症を抑制する効果発現を検証することである。具体的には研究期間内に次の2点を中心に研究を行った。腸管への直接的な遺伝子導入法として超音波・造影剤併用遺伝子導入法を用い、腸管管腔側より直接的にレポーター遺伝子を導入して、導入時の超音波・造影剤濃度などの条件決定、導入細胞、導入後の発現期間を検討した結果、超音波条件は出力1W/cm2、周波数1MHz、パルス条件は50%、照射時間は120秒が最も導入効率が良く再現性があった。遺伝子導入用マイクロバブル(オプジゾン;Nycomed-Amersham社)のマイクロバブル濃度は最終濃度で30%が最も導入高率が良かった。これらの条件設定で超音波照射装置:Sonitron1000(Rich Mar社)を使用して各種疾患動物モデルで検討した。遺伝子導入にベクターとして大腸菌のプラスミド(pCAGGS;阪大の宮崎教授より供与)を使用し、大腸菌にpCAGGS+遺伝子を組み込みnaked-DNA遺伝子として、遺伝子大量調整を行い、経肛門的アプローチによる遺伝子導入法にてヒトクローン病モデルであるTNBS注腸腸炎モデルの腸管に超音波遺伝子導入を行った結果、プラスミドに組み込まれた神経型NO合成酵素遺伝子が腸管壁に導入され、正常より潰瘍瘢痕の強い狭窄部位における遺伝子導入高率は高かったが、局所における治療的効果および狭窄予防的効果は一部観察されたが、有意な効果は認められなかった。