血小板由来内皮細胞成長因子の血管新生における作用発現機序の解明

阐明血小板源性内皮细胞生长因子对血管生成的作用机制

• 批准号: 17790943
• 负责人: 高森 督
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: University of Fukui
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790943/
• 关键词: PD-ECGF; VSMC; proliferation; migration; gene therapy

血小板由来内皮細胞成長因子(PD-ECGF/Thymidine Phosphorylase;以下TP)の血管平滑筋細胞に対する作用機序を解明すべく研究を行った。ラット血管平滑筋細胞にヒトTP遺伝子を導入し、ヒトTP高発現細胞株を作成した。同時に対照ベクターを導入した細胞株も作成した。こうして得られた各細胞株を用い、以後の実験を行った。先ず基礎実験として、細胞増殖能をMTT assayにて検討した。結果、TP高発現細胞において増殖能が対照群に比べ有意に低下していること、またその作用はTP阻害剤によって阻害されることを明らかにした。次いで細胞遊走能をwound healing assayにて検討した。結果、TP高発現細胞では遊走能も対照群に比べ有意に低下していることを明らかにした。これらのことを踏まえ、いくつかの遺伝子に注目しmRNAレベルでの遺伝子発現の差異を定量PCR法を用いて検討した。ひとっはKLF5(BTBB2/IKLF)遺伝子であった。これは血管平滑筋細胞においてその増殖を調節する遺伝子と考えられており、TP高発現細胞株ではこの遺伝子の発現が対照細胞株よりも有意に低下していた。もうひとつは、肌F5遺伝子の発現を誘導すると考えられているEgr-1遺伝子であり、これも同様にTP高発現細胞株で発現が有意に低下していることを確認した。これらのことは基礎実験の結果を裏付けるものであり、TP遺伝子の平滑筋細胞に対する作用機序がMAPK pathwayを介していることを示唆するものとなった。更にその下流遺伝子と考えられるPDGF-AやTGF-β、cyclin-D1についても同様の検討を行ったが、これらについては有意差を認めなかった。蛋白レベルでの評価についても同様に施行したところmRNAと同様な結果を得るに至った。これらのことより、TP遺伝子は血管平滑筋細胞において、Egr-1及びKLF5遺伝子の発現を調節し、細胞増殖能を低下させていると考えられた。

To clarify the mechanism of action of platelet-derived endothelial growth factor (PD-ECGF/Thymidine Phosphorase; TP) on vascular smooth muscle cells The expression of TP gene was introduced into vascular smooth muscle cells, and TP high expression cell lines were prepared. At the same time, the cell line was introduced into the cell line. The cell lines were used in the experiment and later were used in the experiment. First, basic information, cell proliferation, MTT assay, etc. The results showed that TP increased the proliferation ability of cells in response to radiation and decreased the inhibition ability of TP. The second time, the cell can swim around the wound healing assay. As a result, TP high expression cells can migrate to higher expression levels than normal cells. The differences in gene expression were investigated by quantitative PCR. KLF5(BTBB2/IKLF) The expression of the gene in the smooth muscle cells is intentionally decreased. The expression of Egr-1 gene was detected by PCR, and the expression of TP high expression cell line was detected by PCR. The mechanism of action of the MAPK pathway in the process of transformation is discussed in detail. PDGF-A, TGF-β, cyclin-D1 and other related factors are discussed in this paper. The expression of protein and mRNA is the same as the expression of protein and mRNA. The expression of Egr-1 and KLF-5 genes in vascular smooth muscle cells is regulated by the regulation of cell proliferation.